[發明專利]一種鴨疫里默氏菌乳膠凝集抗體檢測試劑盒及其檢測方法和保存方法

有效

• 申請號: 201710555663.3
• 申請日: 2017-07-10
• 公開（公告）號: CN107356752B
• 公開（公告）日: 2020-07-17
• 發明（設計）人: 羅玲;羅青平;溫國元;邵華斌;張蓉蓉;張騰飛;王紅琳;汪宏才;盧琴
• 申請（專利權）人: 湖北省農業科學院畜牧獸醫研究所
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 崔友明

本發明涉及一種鴨疫里默氏菌乳膠凝集抗體檢測試劑盒及其檢測方法和保存方法，屬禽類免疫學技術領域。所述鴨疫里默氏菌乳膠凝集抗體檢測試劑盒包括：a)乳膠檢測試劑、b)陽性對照品、c)陰性對照品；其中，所述乳膠檢測試劑是鴨疫里默氏菌外膜蛋白ompA致敏羧化聚苯乙烯乳膠試劑，其能與鴨疫里默氏菌抗體產生特異性反應。本發明提供的檢測試劑盒能直接對臨床血清樣品進行快速檢測，且對各種血清型鴨疫里默氏菌抗體特異，具有特異性強、靈敏度高、檢測時間短的特點，無需特殊儀器設備，操作簡單、方便快捷、檢測成本低，肉眼可判斷結果，適合產品研發和大規模生產的要求。

技術領域

本發明涉及一種鴨疫里默氏菌乳膠凝集抗體檢測試劑盒及其檢測方法和保存方法，屬禽類免疫學技術領域。

背景技術

鴨疫里默氏菌(Riemerella anatipestifer,RA)病是重要的水禽細菌病，是由鴨疫里默氏菌引起家鴨、火雞、鵝和其它多種禽類的一種接觸性傳染病，又名鴨傳染性漿膜炎，其主要的剖檢病理變化為纖維素性心包炎、肝周炎、氣囊炎、腦膜炎、干酪性輸卵管炎等。該病感染宿主范圍廣，發病率和死亡率很高，易產生耐藥性，且血清型眾多，不同血清型之間缺乏免疫保護，給該病的防治工作帶來很大困難，已對養鴨業造成了巨大的經濟損失。雖然國內外已經先后報道了檢測RA血清抗體的瓊脂擴散試驗、間接ELISA以及間接免疫熒光檢測方法等，但這些方法存在靈敏度低、操作步驟繁瑣、技術要求高等缺點，且只能在設備齊全和有經過專業訓練人員的實驗室條件下進行，不利于疫病的臨床快速篩查。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的缺陷，提供一種鴨疫里默氏菌乳膠凝集抗體檢測試劑盒及其檢測方法。該試劑盒適合臨床快速檢測鴨疫里默氏菌抗體，對由鴨疫里默氏菌引起的疫病的流行病學調查及防控有重要意義。

本發明為解決上述技術問題而采取的技術方案為：

一種鴨疫里默氏菌乳膠凝集抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：

a)乳膠檢測試劑、

b)陽性對照品、

c)陰性對照品；

其中，所述乳膠檢測試劑是鴨疫里默氏菌外膜蛋白ompA致敏羧化聚苯乙烯乳膠試劑，其能與鴨疫里默氏菌抗體產生特異性反應。

按上述方案，優選地，所述鴨疫里默氏菌外膜蛋白ompA致敏羧化聚苯乙烯乳膠試劑的制備步驟包括：

1)鴨疫里默氏菌重組蛋白ompA的制備；

2)鴨疫里默氏菌外膜蛋白ompA致敏羧化聚苯乙烯乳膠試劑的制備。

按上述方案，更優選地，所述鴨疫里默氏菌重組蛋白ompA的制備包括下述步驟：

(一)鴨疫里默氏菌重組蛋白ompA的表達，具體如下：

(1)質粒構建步驟：根據GenBank公布的鴨疫里默氏菌ompA基因全序列，設計了特異性引物，并分別在上游與下游插入BamHⅠ和XhoⅠ酶切位點，由上海生物工程技術服務有限公司合成：上游引物F：5’-CCCATGGATCCATGGACAAGGAGTTTATGTTG-3’，下游引物R：5’-CCGCCTCGAGTTATTTTCTTTTCTTTTTTACTAC-3’；將以Ⅰ型鴨疫里默氏菌代表菌株的基因組為模板擴增的ompA基因與原核表達載體pET-28a(+)連接，轉化后挑取20-25個單菌落提取質粒并用BamHⅠ和XhoⅠ雙酶切驗證，電泳可見約1200bp的條帶、測序ompA基因全長為1164bp即為所構建重組質粒；

(2)將已構建的pET-28a(+)-ompA重組質粒轉化至感受態細胞BL21(DE3)；