[發(fā)明專利]一種蛹蟲草活性組分的分離純化方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710554975.2
• 申請日: 2017-07-10
• 公開（公告）號: CN107266513B
• 公開（公告）日: 2020-06-09
• 發(fā)明（設計）人: 陳劍清;呂正兵;祝天賜;呂雅雯;朱俊德;汪雯映
• 申請（專利權）人: 浙江理工大學
• 主分類號: C07H19/16
• 分類號: C07H19/16;C07H1/08
• 代理公司: 浙江納祺律師事務所 33257
• 代理人: 鄭滿玉

本發(fā)明公開的是一種蛹蟲草活性組分的分離純化方法，具體包括以下步驟：將蛹蟲草烘干粉碎，蛹蟲草粉末用75％?100％乙醇抽提，提取的上清液旋干得到固體，將固體用水溶解后與Oligo(dT)進行親和，水浴加熱，去除上清液，獲得蟲草素溶液，本發(fā)明通過酒精將蛹蟲草中的核酸類物質去除，避免了后續(xù)過程中的核酸污染，通過親和層析來分離純化蟲草素，吸附性強，特異性高，避免了有效損失，提高了有效成分的純度，生產周期短，成本低，對設備要求低，操作簡單，易于推廣市場潛力大，分離純化過程避開了有害溶劑的污染，提取物安全無毒，綠色環(huán)保。

技術領域

本發(fā)明涉及一種分離純化方法，更具體一點說，涉及一種蛹蟲草活性組分的分離純化方法。

背景技術

蛹蟲草為子囊菌門，肉座目，麥角菌科、蟲草屬的模式種，學名為Cordycepsmilitaris，又名北蛹蟲草。蛹蟲草中含有多種化學成分，具有多種藥用功效，與冬蟲夏草的藥理功能和臨床效果相似，但價格卻遠遠低于冬蟲夏草，因此蛹蟲草逐漸成為冬蟲夏草的替代品，具有極大的潛在市場。其主要活性成分包括腺苷、蟲草素、蟲草多糖等，目前研究最多應用最廣的無疑是蟲草素，鑒于蟲草素抗腫瘤等活性，人們對蟲草素的需求也越來越大。

目前獲得蟲草素的方式主要是通過分離提取獲得，蟲草素常規(guī)提取方法如水提法，水提醇沉法，醇提法等，提取過程單一，無法徹底提取蛹蟲草中的有效成分，而輔助提取手段通常有微波、超聲、酶法等，國內關于蟲草素分離的技術手段主要為層析法，從總體上而言，這些提取方法在保留有效成分，棄除無效成分方面，仍存在提取不夠充分，有效成分損失大，工序多，周期長，成本高等缺點。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于解決現有技術問題，提供具有分離簡單、純度高、周期短等技術特點的一種蛹蟲草活性組分的分離純化方法。

本發(fā)明是通過以下技術方案實現：

本發(fā)明一種蛹蟲草活性組分的分離純化方法，該方法采用如下步驟：

步驟1)：將蛹蟲草置于50-70℃條件下烘干至蛹蟲草含水量在8％以下，超微粉碎5-15min，獲得超微蛹蟲草粉；

步驟2)：將步驟1)獲得的超微蛹蟲草粉加入到濃度為75-100％的乙醇溶液中，充分攪拌溶解，超聲30-60min，靜置1-12h，置于轉速為8000-10000rpm離心機內離心獲取上清液，重復1-2次，合并上清液；

步驟3)：將步驟2)合并的上清液旋干獲得固體，將固體置于燒杯中，緩慢加入蒸餾水溶解，并充分攪拌，獲得濃度為0.9-1.1mg/ml溶液，再將溶液置于轉速為8000-10000rpm離心機內離心，獲得初步提取液；

步驟4)：按質量份數，將400-600份偶聯了Oligo(dT)的磁珠用400-600份水洗滌兩次，加入100-300份初步提取液，重置磁珠，置于室溫條件下反應5-10min，用磁性分離器進行磁性分離，在磁性分離器上用移液器將上清液棄去；再加入100-300份水，混勻磁珠，用磁性分離器進行磁性分離，在磁性分離器上用移液器移取上清液棄去，重復兩次；繼續(xù)加入50-200份水，混勻磁珠，置于65-100℃水浴加熱5-30min，快速置于磁性分離架上，進行磁性分離，快速收集上清液，獲得蟲草素溶液。

作為一種優(yōu)選，步驟2)中所述微蛹蟲草粉與濃度為70-100％乙醇質量比為1:5-20。

本發(fā)明一種蛹蟲草活性組分的分離純化方法，該方法采用如下步驟：

步驟1)：將蛹蟲草置于60℃條件下烘干至蛹蟲草含水量在8％以下，超微粉碎8min，獲得超微蛹蟲草粉；

步驟2)：將步驟1)獲得的超微蛹蟲草粉加入到濃度為85％的乙醇溶液中，充分攪拌溶解，超聲45min，靜置8h，置于轉速為9000rpm離心機內離心獲取上清液，重復1次，合并上清液；