[發(fā)明專利]一種蛹蟲草活性組分的分離純化方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710554975.2
• 申請日: 2017-07-10
• 公開（公告）號(hào): CN107266513B
• 公開（公告）日: 2020-06-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳劍清;呂正兵;祝天賜;呂雅雯;朱俊德;汪雯映
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江理工大學(xué)
• 主分類號(hào): C07H19/16
• 分類號(hào): C07H19/16;C07H1/08
• 代理公司: 浙江納祺律師事務(wù)所 33257
• 代理人: 鄭滿玉

1.一種蛹蟲草活性組分的分離純化方法，其特征在于，該方法采用如下步驟：

步驟1)：將蛹蟲草置于50-70℃條件下烘干至蛹蟲草含水量在8％以下，超微粉碎5-15min，獲得超微蛹蟲草粉；

步驟2)：將步驟1)獲得的超微蛹蟲草粉加入到濃度為75-100％的乙醇溶液中，充分?jǐn)嚢枞芙猓?0-60min，靜置1-12h，置于轉(zhuǎn)速為8000-10000rpm離心機(jī)內(nèi)離心獲取上清液，重復(fù)1-2次，合并上清液；步驟2)中所述超微蛹蟲草粉與濃度為75-100％的乙醇質(zhì)量比為1:5-20；

步驟3)：將步驟2)合并的上清液旋干獲得固體，將固體置于燒杯中，緩慢加入蒸餾水溶解，并充分?jǐn)嚢瑁@得濃度為0.9-1.1mg/ml溶液，再將溶液置于轉(zhuǎn)速為8000-10000rpm離心機(jī)內(nèi)離心，獲得初步提取液；

步驟4)：按質(zhì)量份數(shù)，將400-600份偶聯(lián)了Oligo(dT)的磁珠用400-600份水洗滌兩次，加入100-300份初步提取液，重置磁珠，置于室溫條件下反應(yīng)5-10min，用磁性分離器進(jìn)行磁性分離，在磁性分離器上用移液器將上清液棄去；再加入100-300份水，混勻磁珠，用磁性分離器進(jìn)行磁性分離，在磁性分離器上用移液器移取上清液棄去，重復(fù)兩次；繼續(xù)加入50-200份水，混勻磁珠，置于65-100℃水浴加熱5-30min，快速置于磁性分離架上，進(jìn)行磁性分離，快速用移液器移取上清液棄去，獲得蟲草素溶液。

2.一種蛹蟲草活性組分的分離純化方法，其特征在于，該方法采用如下步驟：

步驟1)：將蛹蟲草置于60℃條件下烘干至蛹蟲草含水量在8％以下，超微粉碎10min，獲得超微蛹蟲草粉；

步驟2)：將步驟1)獲得的超微蛹蟲草粉加入到濃度為85％的乙醇溶液中，充分?jǐn)嚢枞芙猓?5min，靜置8h，置于轉(zhuǎn)速為9000rpm離心機(jī)內(nèi)離心獲取上清液，重復(fù)1次，合并上清液；

步驟3)：將步驟2)合并的上清液旋干獲得固體，將固體置于燒杯中，緩慢加入蒸餾水溶解，并充分?jǐn)嚢瑁@得濃度為1.0mg/ml溶液，再將溶液置于轉(zhuǎn)速為9000rpm離心機(jī)內(nèi)離心，獲得初步提取液；

步驟4)：按質(zhì)量份數(shù)，將500份偶聯(lián)了Oligo(dT)的磁珠用500份水洗滌兩次，加入200份初步提取液，重置磁珠，置于室溫條件下反應(yīng)8min，用磁性分離器進(jìn)行磁性分離，在磁性分離器上用移液器將上清液棄去，加入200份水，混勻磁珠，用磁性分離器上進(jìn)行磁性分離，在磁性分離器上用移液器移取上清棄去，重復(fù)兩次，加入125份水，混勻磁珠，置于80℃水浴加熱18min，快速置于磁性分離架上，進(jìn)行磁性分離，快速用移液器移取上清液棄去，獲得蟲草素溶液。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種蛹蟲草活性組分的分離純化方法，其特征在于：步驟2)中所述超微蛹蟲草粉與濃度為85％的乙醇質(zhì)量比為1:8。