[發(fā)明專利]一種檢測遺傳性耳聾基因的建庫試劑盒和應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710552357.4
• 申請日: 2017-07-07
• 公開（公告）號: CN107287314A
• 公開（公告）日: 2017-10-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄒婧;李全;侯強(qiáng);張春楊;譚宏東
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳華大智造科技有限公司;華大生物科技（武漢）有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;C12N15/10;C40B50/06
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司11332
• 代理人: 鞏克棟

1.一種檢測遺傳性耳聾基因的建庫試劑盒，其特征在于，所述建庫試劑盒包括用于擴(kuò)增遺傳性耳聾基因的擴(kuò)增引物組；

所述擴(kuò)增引物組包括根據(jù)GJB2、GJB3、SLC26A4基因和12s rRNA基因的突變位點的多態(tài)性設(shè)計的引物；

其中，所述GJB2基因包括35delG、167delT、176-191del16、299_300delAT和235delC基因；所述GJB3基因包括538C>T和547G>A；所述SLC26A4基因包括281C>T、589G>A、IVS7-2A>G、1174A>T、1226G>A、1229C>T、1975G>C、2027T>A、2162C>T、2168A>G和IVS15+5G>A；所述12s rRNA基因包括1494C>T、1555A>G和1095T>C。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的建庫試劑盒，其特征在于，所述擴(kuò)增引物組如SEQ ID NO.1-24所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的建庫試劑盒，其特征在于，所述擴(kuò)增引物組的每條引物的5’端加入樣品標(biāo)簽序列。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項所述的建庫試劑盒，其特征在于，所述樣品標(biāo)簽序列的長度為7-10bp，優(yōu)選為7bp。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項所述的建庫試劑盒，其特征在于，所述樣品標(biāo)簽序列如SEQ ID NO.25-120所示。

6.一種遺傳性耳聾相關(guān)基因的文庫構(gòu)建方法，其特征在于，包括如下步驟：

采用權(quán)利要求1-5中任一項所述的建庫試劑盒，在所述引物組的5’端加入建庫試劑盒中所述的樣品標(biāo)簽序列，加入反應(yīng)液中對樣品進(jìn)行多重PCR反應(yīng)，將帶有不同樣本標(biāo)簽序列的多個樣本的PCR產(chǎn)物等比例混合成一個文庫樣本，得到所述遺傳性耳聾相關(guān)基因的文庫；

優(yōu)選地，所述文庫構(gòu)建方法還包括如下步驟：(1)PCR產(chǎn)物磷酸化；(2)末端修復(fù)；(3)連接測序接頭；(4)PCR擴(kuò)增文庫；(5)文庫環(huán)化；(6)納米球制備；(7)測序分析。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的文庫構(gòu)建方法，其特征在于，所述多重PCR反應(yīng)的體系為無核酸酶水5.5μL、PCR擴(kuò)增液12.5μL、擴(kuò)增引物組2μL和DNA樣品5μL；

優(yōu)選地，所述多重PCR反應(yīng)的條件為94℃2min；94℃20s，56℃30s，60℃20s，35個循環(huán)；72℃5min；PCR產(chǎn)物保存在12℃。

8.一種如權(quán)利要求6或7所述的方法構(gòu)建得到的遺傳性耳聾相關(guān)基因的文庫。

9.一種用于非診斷目的的遺傳性耳聾相關(guān)基因的檢測方法，其特征在于，將權(quán)利要求8所述遺傳性耳聾相關(guān)基因的文庫采用聯(lián)合探針錨定聚合測序法進(jìn)行測序。

10.權(quán)利要求1-5中任一項所述的檢測遺傳性耳聾基因的建庫試劑盒、如權(quán)利要求8所述的文庫或如權(quán)利要求9所述的檢測方法用于非診斷目的的人遺傳性耳聾基因的檢測。