[發(fā)明專利]一種檢測β珠蛋白基因點突變的靶序列互補(bǔ)淬滅探針及其試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710551865.0
• 申請日: 2017-07-07
• 公開（公告）號: CN107385028B
• 公開（公告）日: 2020-11-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 周萬軍;徐湘民;熊符;張強(qiáng);溫曉君
• 申請（專利權(quán)）人: 南方醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44205
• 代理人: 胡輝;舒勝英

1.用于檢測人類β珠蛋白基因點突變的靶序列互補(bǔ)淬滅探針組，其特征在于，所述靶序列互補(bǔ)淬滅探針組的序列如SEQ ID NO：5～36所示。

2.一種檢測β珠蛋白基因點突變的試劑盒，其特征在于，該試劑盒含有權(quán)利要求1所述的靶序列互補(bǔ)淬滅探針組。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，該試劑盒還含有特異性擴(kuò)增β珠蛋白基因突變熱點序列的引物組。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述引物組序列如SEQ ID NO：1～4所示。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，該試劑盒還含有TaKaRa LA Taq酶、LATaq Buffer、dNTPS、甜菜堿。

6.一種檢測β珠蛋白基因點突變的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)提取樣品中的gDNA及以配制檢測試劑，檢測試劑的配制體系如下：

CD43M:5’-CY5-ctgtaggttcttttagtcctttggctacag-BHQ2-3’(SEQ ID NO：31)；

CD71/72W:5’-HEX-ccacgatgtgcctttagtgatggcctgtacgtgg-BHQ1-3’(SEQ ID NO：32)；

CD71/72A:5’-HEX-ccacatcggtgcctttaagtgatatgtgg-BHQ1-3’(SEQ ID NO：33)；

CD71/72T:5’-HEX-ccacaggtgccttttagtgatgtgg-BHQ1-3’(SEQ ID NO：34)；

654W:5’-FAM-ccttgatttctgggttaaggcaatagcaatatcaagg-BHQ1-3’(SEQ ID NO：35)；

654M:5’-FAM-ccttgatttctgggttaaggtaatagcaatcaagg-BHQ1-3’(SEQ ID NO：36)；

然后再配制上機(jī)檢測反應(yīng)管1和反應(yīng)管2的反應(yīng)體系，具體反應(yīng)體系如下：

(2)將上述反應(yīng)管1和反應(yīng)管2中的反應(yīng)體系進(jìn)行熒光定量PCR檢測；記錄解鏈分析圖譜及對應(yīng)解鏈溫度值；

(3)數(shù)據(jù)分析和結(jié)果判斷：儀器配套軟件會根據(jù)解鏈分析熒光信號的變化而自動顯示解鏈分析峰圖，峰圖峰尖處對應(yīng)的溫度即為解鏈溫度，根據(jù)解鏈分析圖譜和解鏈溫度確定是否發(fā)生基因突變；

所述方法不用于疾病的診斷。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，步驟2)中所述的熒光定量PCR反應(yīng)程序為：95℃預(yù)變性5min；95℃30sec、64℃30sec、72℃30sec，50個循環(huán)；95℃變性5min；40℃復(fù)性30min；40℃-70℃解鏈分析并采集不同通道的熒光信號。