[發(fā)明專利]哌拉西林誘導(dǎo)溶血檢測試劑盒及其制備方法

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• 申請日: 2017-07-07
• 公開（公告）號: CN107132323A
• 公開（公告）日: 2017-09-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳亞平;吳明磊
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇中濟萬泰生物醫(yī)藥有限公司
• 主分類號: G01N33/15
• 分類號: G01N33/15;G01N33/559
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種哌拉西林誘導(dǎo)溶血檢測試劑盒，其特征在于：它包括盒體（1）和盒蓋（2），所述盒體（1）底面上設(shè)置有防滑膠層（3），所述盒體（1）內(nèi)設(shè)置有哌拉西林誘導(dǎo)型溶血檢測試劑卡I和哌拉西林誘導(dǎo)型溶血檢測試劑卡II，所述哌拉西林誘導(dǎo)型溶血檢測試劑卡I和哌拉西林誘導(dǎo)型溶血檢測試劑卡II均包括豎直固定板（4），所述豎直固定板（4）頂部設(shè)置有水平支撐板（5），所述水平支撐板（5）上設(shè)置有多個微柱型凝膠管（6），所述微柱型凝膠管（6）包括反應(yīng)腔（6.1）和凝膠分離柱（6.2），所述反應(yīng)腔（6.1）位于凝膠分離柱（6.2）上方，所述反應(yīng)腔（6.1）頂部設(shè)置有一圈凸緣（6.3），所述凝膠分離柱（6.2）內(nèi)自上而下設(shè)置有多層分離網(wǎng)（6.4），所述凸緣（6.3）擱置于水平支撐板（5）上，所述水平支撐板（5）下方設(shè)置有支撐架（7），所述微柱型凝膠管（6）插裝于支撐架（7）內(nèi)，所述水平支撐板（5）上方設(shè)置有保護(hù)膜（8），所述保護(hù)膜（8）覆蓋于多個微柱型凝膠管（6）的凸緣（6.3）上。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種哌拉西林誘導(dǎo)溶血檢測試劑盒，其特征在于：所述反應(yīng)腔（6.1）內(nèi)壁上均勻設(shè)置有多個緩沖凸點（6.5）。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種哌拉西林誘導(dǎo)溶血檢測試劑盒，其特征在于：所述水平支撐板（5）正面平行設(shè)置有多個隔條（9），所述隔條（9）設(shè)置于相鄰兩個微柱型凝膠管（3）之間。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種哌拉西林誘導(dǎo)溶血檢測試劑盒，其特征在于：所述哌拉西林誘導(dǎo)型溶血檢測試劑卡I有6個微柱型凝膠管（6），每個微柱管中均含有葡聚糖凝膠顆粒，凝膠顆粒中含有抗IgG或抗C3d成分；所述哌拉西林誘導(dǎo)型溶血檢測試劑卡II有8個微柱型凝膠管（6），每個微柱管中均含有葡聚糖凝膠顆粒，凝膠顆粒中含有抗IgG+C3d成分。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種哌拉西林誘導(dǎo)溶血檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒的盒體內(nèi)還設(shè)置有哌拉西林處理紅細(xì)胞、非哌拉西林處理紅細(xì)胞、抗體陽性對照液和抗體陰性對照液，所述哌拉西林處理紅細(xì)胞是通過哌拉西林藥物溶液處理的正常O型Rh陰性紅細(xì)胞，濃度為2～2.5%；所述非哌拉西林處理紅細(xì)胞是濃度為2～2.5%的正常O型Rh陰性紅細(xì)胞；所述哌拉西林抗體陽性対照液是哌拉西林抗體陽性血清；所述哌拉西林抗體陰性對照液是哌拉西林抗體陰性血清。

6.一種哌拉西林誘導(dǎo)溶血檢測試劑盒的制備方法，其特征在于所述方法包括如下步驟：

一、哌拉西林誘導(dǎo)型溶血檢測試劑卡I的制備：

步驟一、量取

按批量使用符合要求的器具將葡聚糖凝膠量取轉(zhuǎn)移至潔凈并滅菌的容器中；

步驟二、洗滌

用0.9%氯化鈉溶液洗滌葡聚糖凝膠，0.9%氯化鈉溶液與葡聚糖凝膠體積比為2:1，充分混勻，2000rpm離心1分鐘后移去上清液，重復(fù)操作6~8次，得洗滌后凝膠，作好標(biāo)識，洗滌后的凝膠中可添加乳糖0.02-0.1（v/v）%、以及檸檬酸三鉀20mg-40 mg %；

步驟三、配制

按批量分別量取抗人球蛋白試劑、抗人球蛋白試劑、0.9%氯化鈉溶液，按抗體與凝膠體積比1:5的比例，將上述試劑分別加入洗滌后凝膠中混合，分別用器具混合均勻成抗體凝膠，分別作好標(biāo)識；

步驟四、灌裝、離心

將步驟三配制的凝膠按照每孔20～30 μl的抗體凝膠量將各種凝膠加入微管中；

微管序號123456抗體凝膠抗IgG凝膠抗C₃d凝膠空白凝膠抗IgG凝膠抗C₃d凝膠空白凝膠

步驟五、封口

離心結(jié)束后，卡轉(zhuǎn)移至封口機上封口；封口條件為：壓力3.0 kg、溫度163±2℃，時間4秒/卡；

二、哌拉西林誘導(dǎo)型溶血檢測試劑卡II的制備：

步驟一、量取

按批量使用符合要求的器具將葡聚糖凝膠量取轉(zhuǎn)移至潔凈并滅菌的容器中；

步驟二、洗滌

用0.9%氯化鈉溶液洗滌葡聚糖凝膠，0.9%氯化鈉溶液與葡聚糖凝膠II，體積比為2:1，充分混勻，2000 rpm離心1分鐘后移去上清液，重復(fù)操作6～8次，再用凝膠浸泡液浸泡所得凝膠15分鐘，凝膠浸泡液與凝膠體積比為1:1，2000 rpm離心1分鐘后移去上清液，得洗滌后凝膠，作好標(biāo)識，洗滌后的凝膠中可添加乳糖0.02-0.1（v/v）%、以及檸檬酸三鉀20mg-40 mg %；

步驟三、配制

量取抗人球蛋白試劑，按抗體與凝膠體積比為1:5～1:2的比例，將抗人球蛋白試劑加入洗滌后的凝膠中混合，分別用器具混合均勻成抗體凝膠，作好標(biāo)識待用；

步驟四、灌裝、離心

將步驟二配制的凝膠按照每孔25～35 μl的抗體凝膠量將抗人球蛋白試劑凝膠加入微管中；

微管序號12345678抗體凝膠抗IgG＋C₃d凝膠抗IgG＋C₃d凝膠抗IgG＋C₃d凝膠抗IgG＋C₃d凝膠抗IgG＋C₃d凝膠抗IgG＋C₃d凝膠抗IgG＋C₃d凝膠抗IgG＋C₃d凝膠

步驟五、封口

離心結(jié)束后，卡轉(zhuǎn)移至封口機上封口；封口條件為：0.3～0.35 MPa壓力、溫度158±1℃，時間3秒/卡；

三、哌拉西林處理紅細(xì)胞的制備：

步驟一、過濾、洗滌

取O型原料血紅細(xì)胞，用一次性白細(xì)胞過濾器過濾，將三人份的O型原料血紅細(xì)胞混合，用0.9%氯化鈉溶液洗滌，原料血與0.9%氯化鈉溶液體積比為1:4，3000 rpm離心1分鐘后移去上清液，重復(fù)操作2～4次；

步驟二、藥物致敏

a、哌拉西林藥物溶液配制：稱取硼酸、氯化鉀，加純化水充分溶解，配制為0.1 mol/L pH為9.3～10.2的硼酸緩沖液，加入稱取的哌拉西林，充分溶解混勻，即得哌拉西林藥物溶液；

b、哌拉西林藥物處理細(xì)胞：量取哌拉西林藥物溶液，加入O型紅細(xì)胞壓積，37℃孵育1小時，每隔10～20分鐘混勻一次，0.9%氯化鈉溶液洗滌致敏紅細(xì)胞2～4次或直到上清無溶血現(xiàn)象，用紅細(xì)胞保存液稀釋至2～2.5%濃度，2～8℃保存；所述紅細(xì)胞保存液中至少包括膽固醇200～600mg/L、人血清白蛋白5～20g/L、乳糖0.02-0.1（v/v）%、十八烷基胺乙酸堿金屬鹽1000-1800mg/L、聚醚硫酸堿金屬鹽1000-1800mg/L、堿金屬如鈉、鉀作為調(diào)節(jié)劑；

步驟三、分裝

取哌拉西林藥物處理細(xì)胞，分裝至滴瓶中，每瓶2.5 ml，于2～8℃保存；

四、非哌拉西林處理細(xì)胞的制備：

步驟一、過濾、洗滌

取O型原料血紅細(xì)胞，用一次性白細(xì)胞過濾器過濾，將三人份的O型原料血紅細(xì)胞混合，用0.9%氯化鈉溶液洗滌，原料血與0.9%氯化鈉溶液體積比為1:4，3000 rpm離心1分鐘后移去上清液，重復(fù)操作2～4次，用紅細(xì)胞保存液稀釋至2～2.5%濃度，2～8℃保存；所述紅細(xì)胞保存液中至少包括膽固醇200～600mg/L、人血清白蛋白5～20g/L、乳糖0.02-0.1（v/v）%、十八烷基胺乙酸堿金屬鹽1000-1800mg/L、聚醚硫酸堿金屬鹽1000-1800mg/L、堿金屬如鈉、鉀作為調(diào)節(jié)劑；

步驟二、分裝

取非哌拉西林藥物處理細(xì)胞，分裝至滴瓶中，每瓶1 ml，于2～8℃保存；

五、哌拉西林抗體陽性對照的制備：

步驟一、過濾

取哌拉西林抗體陽性血清，過濾；

步驟二、分裝

取過濾后的哌拉西林抗體陽性血清，分裝至聚乙烯瓶中，每瓶1.5 ml，于2～8℃保存；

六、哌拉西林抗體陰性對照的制備：

步驟一、過濾

取哌拉西林抗體陰性血清，過濾；

步驟二、分裝

取過濾后的哌拉西林抗體陰性血清，分裝至聚乙烯瓶中，每瓶1.5 ml，于2～8℃保存。