[發明專利]一種法氏囊素脂質體的制備方法

在審

• 申請號: 201710549728.3
• 申請日: 2017-07-07
• 公開（公告）號: CN107137694A
• 公開（公告）日: 2017-09-08
• 發明（設計）人: 呂小婷;胡萬榮;徐磊;劉友霖
• 申請（專利權）人: 派生特（福州）生物科技有限公司
• 主分類號: A61K38/01
• 分類號: A61K38/01;A61K39/39;A61K9/127;A61P37/04;C07K1/34;C07K1/14
• 代理公司: 福州君誠知識產權代理有限公司35211
• 代理人: 戴雨君

1.一種法氏囊素脂質體的制備方法，其特征在于：其包括以下步驟：

1)將磷脂與膽固醇按照質量比1∶3-5混合均勻，得到脂質混合物；

2）在惰性氣體環境中，將上述脂質混合物溶解于乙醚中，然后加入待包封的法氏囊素水相，得到水-有機溶劑兩相體系，并使體系始終處于惰性氣體環境中；

3） 將上述兩相體系置于超聲儀中進行超聲反應，直至體系中的混合物變為澄清的單相分散體或有乳光的均勻分散體為止；

4）超聲結束后，將體系中的混合物置于旋轉蒸發儀中，減壓旋轉蒸發除去混合物中的殘留的乙醚；

5）收集上述旋轉蒸發后得到的混合物，離心，收集固相，得到法氏囊素脂質體。

2.根據權利要求1所述的一種法氏囊素脂質體的制備方法，其特征在于：所述步驟1），磷脂與膽固醇的質量比為1∶4。

3.根據權利要求1所述的一種法氏囊素脂質體的制備方法，其特征在于：所述步驟2），法氏囊素水相的濃度為1 mg/mL。

4.根據權利要求1所述的一種法氏囊素脂質體的制備方法，其特征在于：所述步驟3），超聲功率為100-150W，超聲時間為10-60min。

5.根據權利要求1所述的一種法氏囊素脂質體的制備方法，其特征在于：所述步驟3），超聲溫度為10℃以下。

6.根據權利要求1所述的一種法氏囊素脂質體的制備方法，其特征在于：所述步驟4），旋轉蒸發的轉速為150-250 r/min。

7.根據權利要求1所述的一種法氏囊素脂質體的制備方法，其特征在于：所述步驟4）的旋轉蒸發過程，先維持旋轉蒸發瓶內的壓強為500~700mmHg，旋轉蒸發25-35min除去混合物中的大部分殘留乙醚，然后將旋轉蒸發瓶內壓強降低至400~600mmHg，旋轉蒸發15-20 min除去混合物中痕量的乙醚。

8.根據權利要求1所述的一種法氏囊素脂質體的制備方法，其特征在于：所述步驟5），離心條件為：2~8℃條件下，20000-25000g離心25-35 min。

9.根據權利要求1所述的一種法氏囊素脂質體的制備方法，其特征在于：所述步驟2），法氏囊素的制備方法如下：

1）取雞法氏囊，去除脂肪、筋膜，用注射用水清洗干凈后，按法氏囊與注射用水的重量比為1∶1-3混合均勻，然后用搗碎機搗碎，搗碎后的法氏囊經膠體磨勻漿后得到勻漿液，并于-20℃以下凍存；

2）取出凍存的勻漿液反復凍融4-6次；

3）將凍融結束的勻漿液于2~8℃條件下，6000-8000 r/min離心15-25min，取上清液；

4）在上清液中加入終濃度為0.01-0.02%β-丙內酯，于2-8℃下攪拌16-32 h進行滅活；

5）將滅活后的溶液于35-39℃水解2-3 h；

6）將水解后的溶液用0.22-0.45μm濾膜進行切向流微濾，收集微濾透過液并采用1-5 kD濾膜進行切向流超濾，收集超濾透過液；

7 ）調節超濾透過液的滲透壓使之成為等滲溶液；

8）將上述等滲溶液用0.1-0.22μm除菌過濾器除菌，收集的液體即為法氏囊素。

10.根據權利要求9所述的一種法氏囊素脂質體的制備方法，其特征在于：所述法氏囊素搗碎過程，依次按照轉速16000-17000r/min、18000-19000 r/min、21000 -22000r/min進行搗碎。