[發(fā)明專利]一種控制太白貝母組織培養(yǎng)內(nèi)生菌污染的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710547593.7
• 申請(qǐng)日: 2017-07-06
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107258539B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-06-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胡平;夏燕莉;周先建;楊玉霞;陳鐵柱;方清茂;郭俊霞;吳萍;李青苗;舒光明
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川省中醫(yī)藥科學(xué)院
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 成都金英專利代理事務(wù)所(普通合伙) 51218
• 代理人: 袁英

1.控制太白貝母組織培養(yǎng)內(nèi)生菌污染的方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1、外植體選擇及預(yù)處理：以3～4月挖取的太白貝母新鮮鱗莖為外植體，去掉外層腐爛、褐化的鱗片，切除根系；洗凈鱗莖表面，洗衣粉溶液中浸泡4～6min，擦拭鱗莖表面，流水沖洗0.8～1.2h，再用去離子水沖洗4～6次，濾紙吸干，備用；

S2、外植體消毒處理：將S1處理后的外植體，浸沒(méi)在濃度為0.08～0.12%的氯化汞溶液中，攪拌，于超凈工作臺(tái)中，漂洗，干燥，備用；

S3、小鱗莖誘導(dǎo)分化：將S2得到的無(wú)菌外植體，用滅過(guò)菌的鑷子將其鱗片掰開(kāi)，再用無(wú)菌刀片縱切鱗片得2～4mm寬的條狀小塊，將小塊接種于培養(yǎng)基上培養(yǎng)；

S4、繼代培養(yǎng)：將S3步驟的培養(yǎng)的小鱗莖在相同培養(yǎng)基上，每20天繼代培養(yǎng)一次，共繼代培養(yǎng)3次；

S5、小鱗莖增殖培養(yǎng)：將S4得到的生長(zhǎng)旺盛的健康小鱗莖，轉(zhuǎn)移至不添加任何滅菌劑的培養(yǎng)基上增殖培養(yǎng)85～95d；

所述S3步驟中培養(yǎng)溫度為18～22℃，相對(duì)濕度為75～85%，光照強(qiáng)度為1000～1500Lx，光照時(shí)間為11～13h；

S3、S4步驟中所述培養(yǎng)基的pH值為5.6～5.8；是由MS基本培養(yǎng)基+3.0～5.0mg/L的6-芐氨基腺嘌呤+0.8～1.2mg/L的α-萘乙酸+4.0～6.0mg/L的青霉素+0.8～1.2g/L的多菌靈+3%蔗糖+9g/L瓊脂組成。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述控制太白貝母組織培養(yǎng)內(nèi)生菌污染的方法，其特征在于，S1步驟中所述洗衣粉溶液是由洗衣粉與水按照重量體積比0.8～1.2g:1000mL配置而成。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述控制太白貝母組織培養(yǎng)內(nèi)生菌污染的方法，其特征在于，S1步驟中所述洗衣粉溶液是由洗衣粉與水按照重量體積比1.0g:1000mL配置而成。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述控制太白貝母組織培養(yǎng)內(nèi)生菌污染的方法，其特征在于，所述S2步驟中攪拌采用磁力攪拌器攪拌，攪拌時(shí)間為6～8min，攪拌速度為150～200r/min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述控制太白貝母組織培養(yǎng)內(nèi)生菌污染的方法，其特征在于，所述S2步驟中漂洗為用無(wú)菌水漂洗3～5次，每次漂洗時(shí)間為3～5min；干燥為用無(wú)菌濾紙吸干。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述控制太白貝母組織培養(yǎng)內(nèi)生菌污染的方法，其特征在于，所述S3步驟中培養(yǎng)溫度為20℃，相對(duì)濕度為80%，光照強(qiáng)度為1000～1500Lx，光照時(shí)間為12h。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的控制太白貝母組織培養(yǎng)內(nèi)生菌污染的方法，其特征在于，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基是由MS基本培養(yǎng)基+4.0mg/L的6-芐氨基腺嘌呤+1.0mg/L的α-萘乙酸+5.0mg/L的青霉素+1.0g/L的多菌靈+3%蔗糖+9g/L瓊脂組成。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述控制太白貝母組織培養(yǎng)內(nèi)生菌污染的方法，其特征在于，S5步驟中所述培養(yǎng)基是由MS基本培養(yǎng)基+3.0～5.0mg/L的6-芐氨基腺嘌呤+0.8～1.2mg/L的α-萘乙酸+3%蔗糖+9g/L瓊脂組成。