[發(fā)明專利]一種抗鏈球菌溶血素O檢測試劑盒及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710547376.8
• 申請日: 2017-07-06
• 公開（公告）號: CN107167586B
• 公開（公告）日: 2019-03-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 徐建建;林婷婷;林源;譚韜
• 申請（專利權(quán)）人: 四川新健康成生物股份有限公司
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531;G01N33/53
• 代理公司: 成都行之專利代理事務(wù)所(普通合伙) 51220
• 代理人: 廖慧敏

本發(fā)明公開了一種抗鏈球菌溶血素O檢測試劑盒，解決了現(xiàn)有技術(shù)均需要用離心或超濾的步驟，費時費力，不利于工業(yè)化的問題。本發(fā)明包括試劑二，該試劑二為采用膠乳、緩沖液、EDC和HEPES混合反應(yīng)后，再加入NaOH調(diào)節(jié)pH至7.00～8.00，最后再加入SLO、封閉劑I和封閉劑II后制成的成品；成品中各物質(zhì)的濃度為：膠乳58.00ml/L～62.00ml/L；緩沖液140.00ml/L；EDC 0.0525g/L～0.0924g/L；HEPES 5.9578g/L；SLO 74.00mg/L～78.00mg/L；封閉劑I 20.00ml/L；封閉劑II 10.00ml/L。本發(fā)明避免了常規(guī)膠乳致敏過程的離心、超濾等去雜過程，大大提高了生產(chǎn)效率，節(jié)約了時間成本和人力成本。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種試劑盒及其制備方法，具體涉及一種抗鏈球菌溶血素O檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術(shù)

免疫比濁法(Turbidimetric inhibition immuno assay)是抗原抗體結(jié)合動態(tài)測定方法。其基本原理是：當(dāng)抗原與抗體在特殊稀釋系統(tǒng)中反應(yīng)而且比例合適(一般規(guī)定抗體過量)時，形成的可溶性免疫復(fù)合物在稀釋系統(tǒng)中的促聚劑(聚乙二醇等)的作用下，自液相析出，形成微粒，使反應(yīng)液出現(xiàn)濁度。當(dāng)抗體濃度固定時，形成的免疫復(fù)合物的量隨著檢樣中抗原量的增加而增加，反應(yīng)液的濁度也隨之增加。通過測定反應(yīng)液的濁度與一系列標(biāo)準(zhǔn)品對照，即可計算出檢樣中抗原的含量。

膠乳增強免疫比濁法即是將待測物質(zhì)相對應(yīng)的抗體/抗原包被在直徑為納米膠乳顆粒上，使抗原抗體結(jié)合物形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，光通過之后，透射光和散射光的強度變化更為顯著，從而提高試驗的敏感性。

北京九強生物技術(shù)股份有限公司的專利公開了涉及膠乳致敏的方法及試劑(申請?zhí)?01010615283.2)，具體而言，所發(fā)明的膠乳致敏的方法為先通過化學(xué)鍵將膠乳與無關(guān)蛋白結(jié)合，再使用戊二醛將抗原或抗體交聯(lián)在無關(guān)蛋白上，從而使膠乳致敏。試劑二的制備過程需要兩次離心換液，不利于工業(yè)化制備。

寧波美康生物科技股份有限公司的專利公開了一種抗鏈球菌溶血素O抗體的檢測試劑盒(申請?zhí)?01410804871.9)。其所述蛋白膠乳顆粒復(fù)合物為組合蛋白標(biāo)記在聚苯乙烯膠乳顆粒上形成的復(fù)合物；所述組合蛋白由鏈球菌溶血素O和惰性蛋白通過化學(xué)交聯(lián)而成。試劑二的制備過程需要一次超濾，兩次離心換液，費時費力。

天津醫(yī)科大學(xué)發(fā)明涉及一種帶有間隔臂的羧化聚苯乙烯微球上偶聯(lián)蛋白質(zhì)的方法(申請?zhí)?01210005525.5)。其所述將偶聯(lián)了抗體的膠乳微球與殘余的抗體分離時采用了切向流過濾技術(shù)，克服了離心分離工藝中抗體易脫落和失活的缺點。

綜上，現(xiàn)有技術(shù)中的制備方法中為了達(dá)到去除過量組分、換緩沖液、改變pH值等目的均需要進(jìn)行離心或超濾步驟，導(dǎo)致現(xiàn)有制備方法費時費力，不利于工業(yè)化。而且，現(xiàn)有技術(shù)記載的文件中引入了惰性蛋白或無關(guān)蛋白，該引入惰性蛋白或無關(guān)蛋白的過程繁瑣，且成功率低、效率低且耗時。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是：現(xiàn)有技術(shù)均需要用離心或超濾的步驟，費時費力，不利于工業(yè)化的問題，目的在于提供了一種抗鏈球菌溶血素O檢測試劑盒及其制備方法，其通過各個組分的投料范圍的優(yōu)化，能有效達(dá)到無需離心、超濾等去過量組分的步驟，使致敏后的膠乳直接作為試劑二參與反應(yīng)，大大提高了常規(guī)膠乳增強免疫比濁試劑的制備效率，避免了耗時耗力的離心、超濾等純化過程。

本發(fā)明通過下述技術(shù)方案實現(xiàn)：

一種抗鏈球菌溶血素O檢測試劑盒，包括試劑二，該試劑二為采用膠乳、緩沖液、EDC和HEPES混合反應(yīng)后，再加入NaOH調(diào)節(jié)pH至7.00～8.00，最后再加入SLO、封閉劑I和封閉劑II后制成的成品；成品中各物質(zhì)的濃度為：