[發(fā)明專利]一種具有益生功能的益生固態(tài)乳酸菌菌劑的制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710545318.1
• 申請(qǐng)日: 2017-07-06
• 公開（公告）號(hào): CN107287136A
• 公開（公告）日: 2017-10-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王婷;王瑞明;孟武;王建斌;隋松森
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 齊魯工業(yè)大學(xué);諸城東曉生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N1/04;C12R1/01;C12R1/23;C12R1/245;C12R1/225;C12R1/25
• 代理公司: 濟(jì)南譽(yù)豐專利代理事務(wù)所(普通合伙企業(yè))37240
• 代理人: 李茜

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物工程領(lǐng)域，具體涉及一種具有益生功能的益生固態(tài)乳酸菌菌劑的制備方法。

背景技術(shù)

活性乳酸菌菌劑具有促進(jìn)腸胃消化吸收、調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡、提高機(jī)體免疫力、防病保健等功能。同時(shí)，乳酸菌制劑因其天然可食用、無毒副作用、安全可靠和易大規(guī)模發(fā)酵等優(yōu)勢(shì)，廣泛應(yīng)用于食品保健、畜牧飼料、水產(chǎn)養(yǎng)殖、微生物發(fā)酵和環(huán)境保護(hù)等行業(yè)。然而，目前市售乳酸菌多為液體菌劑，其劑型單一且保存期相對(duì)較短，而固態(tài)乳酸菌制劑不僅口感細(xì)膩，而且便于儲(chǔ)存和運(yùn)輸。因此，乳酸菌固態(tài)活性菌劑的開發(fā)和制備具有廣闊的市場(chǎng)潛力。

目前，有關(guān)具有顯著益生功能的益生固態(tài)乳酸菌菌劑工藝研究較少，配方有待優(yōu)化升級(jí)。專利CN1369553A公開了一種制備活性乳酸菌固態(tài)制劑的方法，該發(fā)明添加固體淀粉質(zhì)碳源和多種氮源，采用糖化曲霉分解淀粉，并通過低溫干燥制備為固態(tài)制劑。該發(fā)明所述工藝簡(jiǎn)單易行，產(chǎn)品便于保存，但是發(fā)酵菌活不高，且產(chǎn)物營(yíng)養(yǎng)益生物質(zhì)單一。專利CN1400304A公開了一種微生態(tài)制劑的液—固結(jié)合發(fā)酵工藝，該發(fā)明的固體發(fā)酵環(huán)節(jié)在厭氧塑料袋中進(jìn)行，固體基質(zhì)成分簡(jiǎn)單、發(fā)酵規(guī)模受限。專利CN103392911A公開了一種飼用高活性乳酸菌固態(tài)制劑及其制備方法，該發(fā)明采用的粘接劑為梭甲基纖維素鈉或微晶纖維素、聚丙烯酸樹脂Ⅱ，包衣劑為聚丙烯酸樹脂、海藻酸鈉或氯化鈣，該原料雖然能很好的完成固態(tài)制劑造粒，但是這些成分不是有益于腸道益生菌生長(zhǎng)和定植的物質(zhì)，且腸道益生功能未表明。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種具有益生功能的益生固態(tài)乳酸菌菌劑的制備方法，該方法經(jīng)濟(jì)環(huán)保，生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單高效，生產(chǎn)成本低；產(chǎn)品無異味，口感柔和，有天然發(fā)酵乳香味；固態(tài)菌劑制備的冷凍保護(hù)劑采用的全是有助于對(duì)腸道益生菌增殖的原料；乳酸菌具有高酸、膽鹽耐受能力和膽固醇脫除能力，在模擬人工胃腸液中存活率高，具有良好的益生保健功能。

本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的，本發(fā)明提供一種具有益生功能的益生固態(tài)乳酸菌菌劑的制備方法，包括以下步驟：

(1)將添加脫脂奶粉的培養(yǎng)基滅菌，冷至室溫后接入乳酸菌發(fā)酵菌種，恒溫發(fā)酵至脫脂奶粉乳凝固，PH＝4.0-4.5時(shí)發(fā)酵結(jié)束，攪拌、冷卻至室溫，制得乳酸菌活菌劑；

(2)取乳酸菌活菌劑離心并收集菌體，棄上清液后吸取菌懸液，將菌懸液和凍干保護(hù)劑混勻；其中凍干保護(hù)劑為蒙脫土、海藻糖、普魯蘭多糖、谷胱甘肽、抗性淀粉、甘油、異VC酸、水中的一種或幾種混合；

(3)將混勻后的菌懸液倒入待凍干的器皿中預(yù)冷凍。

作為優(yōu)選，所述乳酸菌發(fā)酵菌種來源于青春雙歧桿菌、動(dòng)物雙歧桿菌、兩歧雙歧桿菌、短雙歧桿菌、長(zhǎng)雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、卷曲乳桿菌、保加利亞乳桿菌、德氏乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌、格式乳桿菌、瑞士乳桿菌、副干酪乳桿菌、植物乳桿菌、羅依氏乳桿菌、鼠李糖乳桿菌和唾液乳桿菌中的一種或幾種混合。

本發(fā)明所使用的“W/V”是指重量體積比，即g/ml或kg/L。

作為優(yōu)選，步驟(1)中，所述培養(yǎng)基的配方中添加10-15％(W/V)脫脂奶粉，以及以下混合物：

作為優(yōu)選，步驟(1)中，在培養(yǎng)基上按1～3％的比例接入乳酸菌發(fā)酵菌種。

作為優(yōu)選，步驟(1)中，發(fā)酵溫度為30℃-39℃。發(fā)酵時(shí)間為5-8h，發(fā)酵過程中還可以控制氧氣的量，一般在有氧或微好氧條件下發(fā)酵培養(yǎng)，當(dāng)選擇微好氧條件發(fā)酵時(shí)，氧氣的量為0～0.5mg/L溶解氧。

作為優(yōu)選，步驟(2)中，取乳酸菌活菌劑后采用6000r/min離心5min收集菌體。

作為優(yōu)選，步驟(2)中，加入的凍干保護(hù)劑為甘油0.5-2.5％(W/V)、海藻糖3.0-5.0％(W/V)、抗性淀粉1.0-3.0％(W/V)、普魯蘭多糖1.0-3.0％(W/V)、異VC酸0.1-0.5％(W/V)，谷胱甘肽0.2-0.5mM，蒙脫土0.1-1.0％(W/V)，水5-70％(W/V)中的一種或幾種混合。

作為優(yōu)選，步驟(2)中，所述凍干保護(hù)劑和菌懸液混合的比例為4:1～8:1。

作為優(yōu)選，步驟(2)中，將菌懸液和凍干保護(hù)劑混勻后需要平衡30min。

作為優(yōu)選，步驟(3)中，預(yù)冷凍參數(shù)為：混勻后的菌懸液在4℃冰箱內(nèi)平衡30min后，移入-30℃冰箱內(nèi)平衡60min，再移入冷凍干燥劑中冷凍干燥。