[發(fā)明專利]一種快速檢測石蒜科植物中加蘭他敏含量的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201710539211.6
• 申請日: 2017-07-04
• 公開（公告）號: CN107462656A
• 公開（公告）日: 2017-12-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李青竹;蔡友銘;張永春;楊柳燕;李心
• 申請（專利權(quán)）人: 上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 上海開祺知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司31114
• 代理人: 張曉敏,費(fèi)開逵

1.一種快速檢測石蒜科植物中加蘭他敏含量的方法，包括如下步驟：

1)配制待測樣品液

稱取待測樣品，冷凍干燥后研磨成粉，以醇類有機(jī)溶劑作為提取劑，進(jìn)行至少兩次超聲提取、混勻、離心，合并上清，濃縮，再復(fù)溶，稀釋至濃度0.5～100ng/ml，得待測樣品溶液；

2)檢測

利用液相色譜-串聯(lián)二級質(zhì)譜對待測樣品溶液進(jìn)行檢測，獲得樣品中加蘭他敏的峰面積數(shù)據(jù)；

其中，色譜條件：

液相色譜柱：硅膠型反相色譜柱；

柱溫：40～50℃；

進(jìn)樣量：5～10μL；

流速：0.4～1.0ml/min；

流動(dòng)相：流動(dòng)相A：甲酸-水溶液，流動(dòng)相B：乙腈或甲醇；

洗脫方法：等度洗脫，洗脫時(shí)間≤3.0min，流動(dòng)相A和流動(dòng)相B的體積比為10～50：50～90；

質(zhì)譜條件及掃描方式：

離子源：加熱電噴霧離子源或電噴霧離子源；

離子源噴霧電壓：2500～4500V；

掃描方式：正離子掃描下以一級質(zhì)譜全掃描-數(shù)據(jù)依賴子離子掃描模式或多反應(yīng)檢測模式進(jìn)行分析；

監(jiān)測離子對：母離子m/z 288±1Da和至少一個(gè)加蘭他敏的子離子；

加蘭他敏保留時(shí)間：≤1min；

3)含量計(jì)算

根據(jù)步驟2)的峰面積數(shù)據(jù)和加蘭他敏的標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得待測樣品溶液中加蘭他敏的濃度，再結(jié)合步驟1)中復(fù)溶溶劑體積以及待測樣品干重，計(jì)算樣品中加蘭他敏的含量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述快速檢測石蒜科植物中加蘭他敏含量的方法，步驟3)中所述加蘭他敏的標(biāo)準(zhǔn)曲線是通過以下方法獲得的：取加蘭他敏標(biāo)準(zhǔn)品，配制成濃度在0.5ng/ml～100ng/ml的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，利用液相色譜-串聯(lián)二級質(zhì)譜對加蘭他敏標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測定，利用測得的峰面積數(shù)據(jù)和加蘭他敏標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性方程。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述快速檢測石蒜科植物中加蘭他敏含量的方法，其特征在于，步驟3)中所述測定加蘭他敏標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜條件及質(zhì)譜條件與步驟2)相同。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述快速檢測石蒜科植物中加蘭他敏含量的方法，其特征在于，步驟3)中所述流動(dòng)相A的甲酸-水溶液中，甲酸的含量0.1～1％，v/v。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述快速檢測石蒜科植物中加蘭他敏含量的方法，其特征在于，步驟2)中二級質(zhì)譜監(jiān)測加蘭他敏子離子的質(zhì)荷比m/z范圍為57～288Da。

6.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述快速檢測石蒜科植物中加蘭他敏含量的方法，其特征在于，步驟2)中所述加蘭他敏的子離子選自質(zhì)荷比m/z為231±1Da、213±1Da和198±1Da中的至少一種。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述快速檢測加蘭他敏含量的方法，其特征在于，步驟3)中所述的洗脫時(shí)間為3.0min，加蘭他敏的保留時(shí)間為0.77～0.99min。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述快速檢測加蘭他敏含量的方法，其特征在于，步驟2)中所述復(fù)溶溶劑為甲醇，提取劑為甲醇或乙醇，待測樣品鮮重與提取劑的質(zhì)量體積比為1：2-5，g/ml。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述快速檢測加蘭他敏含量的方法，其特征在于，步驟2)中所述柱溫為40℃，進(jìn)樣量為5μL，流速為0.4ml/min，離子源為加熱電噴霧離子源，掃描方式為正離子Full MS/dd-MS2，離子源噴霧電壓2500V。

10.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述快速檢測加蘭他敏含量的方法，其特征在于，步驟2)中超聲提取時(shí)間為15-40min。