[發明專利]一種納豆激酶菌劑的制備及使用方法

有效

• 申請號: 201710532099.3
• 申請日: 2017-07-03
• 公開（公告）號: CN107254423B
• 公開（公告）日: 2020-04-07
• 發明（設計）人: 涂彩虹;劉繼;張馳松;劉一靜;張正周;馮駿;鄭旗
• 申請（專利權）人: 成都市農林科學院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/54;C12R1/125
• 代理公司: 成都厚為專利代理事務所(普通合伙) 51255
• 代理人: 李坤

本發明公開了一種納豆激酶菌劑的制備及使用方法，其中制備方法包括：S1.準備原料，原料包括：2?18%的納豆激酶產生菌、20?30%的葡萄糖、4?15%的大豆分離蛋白、5?12%的L?絲氨酸、2?6%的L?半胱氨酸和25?50%的麥芽糊精；S2.制備納豆激酶產生菌菌懸液，并將其接種于活化培養基中活化；S3.將活化后的液體培養物接種到擴大培養基中；S4.將擴大培養后的液體培養物離心后去掉上清液，剩下部分即為菌體；S5.將原料中的葡萄糖、L?絲氨酸、L?半胱氨酸、30?70%的大豆分離蛋白和15?35%的麥芽糊精混合均勻得到第一粉劑，將菌體與原料中剩余的大豆分離蛋白和剩余的麥芽糊精混合均勻得到第二粉劑。本發明中制備納豆激酶菌劑的原料投入產出比高，得到的納豆激酶菌劑的發酵產物納豆激酶的活性高。

技術領域

本發明涉及微生物技術領域，特別是涉及一種納豆激酶菌劑的制備及使用方法。

背景技術

納豆激酶(nattokinase簡稱NK)是一種枯草桿菌蛋白激酶，是在納豆發酵過程中由納豆枯草桿菌(Bacillus subtilisl natto)產生的一種絲氨酸蛋白酶，于1980年在納豆中被發現，由275個氨基酸按照固定排列方式組成，分子量是27724，有分解血栓的獨特功能。納豆激酶具有溶解血栓，降低血粘度，改善血液循環，軟化和增加血管彈性等作用。

納豆激酶菌劑的制備可實現納豆小規模速釀生產，使納豆成為價廉易制的保健食品。因此，納豆激酶菌劑的制備對于家庭化制備食用納豆以及納豆的工業化生產具有重要意義。但是，現有納豆激酶菌劑的制備方法的原料投入產出比較低、發酵得到的納豆激酶活性不高。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供一種納豆激酶菌劑的制備及使用方法，提高發酵產物納豆激酶的活性。

本發明的目的是通過以下技術方案來實現的：一種納豆激酶菌劑的制備方法，包括以下步驟：

S1.準備原料：原料包括下述質量百分比含量的組分：2-18%的納豆激酶產生菌、20-30%的葡萄糖、4-15%的大豆分離蛋白、5-12%的L-絲氨酸、2-6%的L-半胱氨酸和25-50%的麥芽糊精；

S2.菌種活化：制備濃度為0.7×10⁶-1.3×10⁶CFU/mL的納豆激酶產生菌菌懸液，按照1-5%的體積比取納豆激酶產生菌菌懸液接種于20~50 mL活化培養基中活化，在30-38℃、100-200r/min的條件下培養18-24h；

S3.擴大培養：將活化后的液體培養物按照1-3%的體積比例接種到擴大培養基中，在30-38℃、100-200r/min的條件下培養18-24h；

S4.離心取菌體：將擴大培養后的液體培養物在3-5℃、8000-10000r/min的條件下離心10-15min，然后去掉上清液，剩下部分即為菌體；

S5.復配：將原料中的全部葡萄糖、全部L-絲氨酸、全部L-半胱氨酸、30-70%的大豆分離蛋白和15-35%的麥芽糊精混合均勻得到第一粉劑，將所述菌體與原料中剩余的大豆分離蛋白和2/3的麥芽糊精混合均勻得到第二粉劑。

優選的，所述制備方法在復配后還包括一個干燥步驟：采用減壓干燥法將第二粉劑進行干燥。

優選的，所述減壓干燥法的具體步驟為：將所述第二粉劑平鋪于干燥器皿中，然后在真空度為40-50kPa、溫度為50-65℃的條件下真空減壓干燥3-5h。

優選的，所述第二粉劑的平鋪厚度小于等于1cm。

優選的，所述活化培養基為營養肉湯培養基。