[發明專利]一種納豆激酶菌劑的制備及使用方法

有效

• 申請號: 201710532099.3
• 申請日: 2017-07-03
• 公開（公告）號: CN107254423B
• 公開（公告）日: 2020-04-07
• 發明（設計）人: 涂彩虹;劉繼;張馳松;劉一靜;張正周;馮駿;鄭旗
• 申請（專利權）人: 成都市農林科學院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/54;C12R1/125
• 代理公司: 成都厚為專利代理事務所(普通合伙) 51255
• 代理人: 李坤

1.一種納豆激酶菌劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1.準備原料：原料包括下述質量百分比含量的組分：2-18%的納豆激酶產生菌、20-30%的葡萄糖、4-15%的大豆分離蛋白、5-12%的L-絲氨酸、2-6%的L-半胱氨酸和25-50%的麥芽糊精；所述納豆激酶產生菌為枯草芽胞桿菌枯草亞種，菌株編號為CICC 21076；

S2.菌種活化：制備濃度為0.7×10⁶-1.3×10⁶CFU/mL的納豆激酶產生菌菌懸液，按照1-5%的體積比取納豆激酶產生菌菌懸液接種于20~50 mL活化培養基中活化，在30-38℃、100-200r/min的條件下培養18-24h；

S3.擴大培養：將活化后的液體培養物按照1-3%的體積比例接種到擴大培養基中，在30-38℃、100-200r/min的條件下培養18-24h；

S4.離心取菌體：將擴大培養后的液體培養物在3-5℃、8000-10000r/min的條件下離心10-15min，然后去掉上清液，剩下部分即為菌體；

S5.復配：將原料中的全部葡萄糖、全部L-絲氨酸、全部L-半胱氨酸、30-70%的大豆分離蛋白和15-35%的麥芽糊精混合均勻得到第一粉劑，將所述菌體與原料中剩余的大豆分離蛋白和剩余的麥芽糊精混合均勻得到第二粉劑。

2.根據權利要求1所述的一種納豆激酶菌劑的制備方法，其特征在于，所述制備方法在復配后還包括一個干燥步驟：采用減壓干燥法將第二粉劑進行干燥。

3.根據權利要求2所述的一種納豆激酶菌劑的制備方法，其特征在于，所述減壓干燥法的具體步驟為：將所述第二粉劑平鋪于干燥器皿中，然后在真空度為40-50kPa、溫度為50-65℃的條件下真空減壓干燥3-5h。

4.根據權利要求3所述的一種納豆激酶菌劑的制備方法，其特征在于，所述第二粉劑的平鋪厚度小于等于1cm。

5.根據權利要求1所述的一種納豆激酶菌劑的制備方法，其特征在于，所述活化培養基為營養肉湯培養基。

6.根據權利要求1所述的一種納豆激酶菌劑的制備方法，其特征在于，所述擴大培養基的pH值為7.2-7.6，所述擴大培養基包括蛋白胨、牛肉膏、NaCl、MnSO₄·H₂O和蒸餾水，所述蛋白胨、牛肉膏、NaCl、MnSO₄·H₂O和蒸餾水的質量比例為9-11：2-4：4-6：0.004-0.006：900-1100。

7.根據權利要求1所述的一種納豆激酶菌劑的制備方法，其特征在于，所述納豆激酶產生菌菌懸液由納豆激酶產生菌和生理鹽水混合制得。

8.如權利要求1-7任意一項所述制備方法制得的納豆激酶菌劑的使用方法，其特征在于，包括：

將黃豆煮熟，瀝去水分，晾涼；

取質量為黃豆0.4-0.6%的納豆激酶菌劑，所述納豆激酶菌劑包括質量比為1.5-2.5：1的第一粉劑和第二粉劑，先將第一粉劑拌入黃豆，攪拌均勻后再將第二粉劑拌入黃豆；

拌勻后將黃豆置于納豆機中，發酵16-22h得到納豆；

將所述納豆置于3-5℃的環境下冷藏9-11h進行后熟。

9.根據權利要求8所述的使用方法，其特征在于，所述使用方法還包括：在將黃豆煮熟前，將黃豆浸泡至少10h。