[發明專利]一種分步發酵甲魚蛋制備抗氧化肽液的方法

在審

• 申請號: 201710529601.5
• 申請日: 2017-07-02
• 公開（公告）號: CN107177657A
• 公開（公告）日: 2017-09-19
• 發明（設計）人: 楊明毅;余艷;高紹利
• 申請（專利權）人: 常德至善生物科技有限公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;A61K8/64;A61Q19/08;A23L33/18;C12R1/125
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技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種分步發酵甲魚蛋制備抗氧化肽液的方法。

背景技術

甲魚的養殖在中國市場具有較高的經濟價值，甲魚蛋作為甲魚養殖的副產物，除了少部分孵化場會將受精蛋孵化成甲魚苗出售，大部分的甲魚蛋都只是被用作普通食品原料加工甚至被丟棄，造成了一定的資源浪費。

人體的正常生理代謝會產生一些活性氧自由基，這些自由基能夠破壞蛋白質、脂肪、核酸等，導致細胞損壞甚至凋亡，對人體造成損害。而抗氧化性活性肽可以通過向自由基提供質子或電子來抑制自由基鏈式反應進行、清除自由基、抑制脂質過氧化，或鰲合金屬離子等不同途徑來發揮抗氧化作用。

目前，抗氧化肽的獲取方式主要有化學合成、蛋白酶酶解、發酵等方式。徐懷德等人對甲魚蛋白進行酶水解得到了抗氧化活性肽；楊明毅等人申請了“一種將甲魚蛋進行酶解法水解制備抗氧化活性液的方法” CN201510150779.X的專利，在此領域具有一定的突破性。但是此方法存在成本高、水解條件要求嚴格、產生的酶解產物具有令人不悅的苦味等缺陷，限制了抗氧化肽的應用。

發酵法是以甲魚蛋液為發酵液，接入產蛋白酶的微生物，利用微生物發酵過程中產生的蛋白酶將蛋白酶解成抗氧化肽。發酵方法與酶解法相比，能將微生物產酶和酶水解兩步合一，省去了酶的分離和提純步驟，減少了生產工序，降低了成本；此外，微生物除了產生蛋白酶外，還能產生纖維素酶、植酸酶等，可以分解細胞壁，有利于蛋白與蛋白酶的活性位點結合，提高水解效率，增加酶解產物的抗氧化活性且微生物產生的端肽酶對小肽末端的修飾作用，使制得的肽具有發酵的天然芳香味，適口性更好。

現有報道的發酵法制備抗氧化肽，主要集中在花生、菜籽粕、豆粕、魚蛋白、乳清蛋白等原料，其效果并不理想，且未見利用微生物發酵甲魚蛋制備抗氧化肽的相關報道。

發明內容

本發明旨在克服現有技術的不足，提供一種一種分步發酵甲魚蛋制備抗氧化肽液的方法。

為了達到上述目的，本發明提供的技術方案為：

所述分步發酵甲魚蛋制備抗氧化肽液的方法包括如下步驟：

（1）對甲魚蛋進行清洗和干燥，并用驗光機對清洗和干燥后的甲魚蛋進行光照挑選，除去變質的甲魚蛋，得到健康的甲魚蛋；

（2）將選好的甲魚蛋放入攪拌機，注入2～5倍甲魚蛋體積的無菌去離子水，攪拌時間為5～25min，攪拌速度200～800r/min；

（3）碟片式離心機離心，轉速3000～6000rpm，時間10～20min，去除上層的的少量油脂和底層的甲魚蛋殼，得到中層的甲魚蛋膜、蛋清、蛋黃混合液（即甲魚蛋混合液）；

（4）將甲魚蛋混合液加入葡萄糖10~20g /L，于100～120℃，壓力0.08～0.1Mpa條件下滅菌15～30min；

（5）將滅菌后的甲魚蛋混合液冷卻至室溫后，加入枯草芽孢桿菌菌種種子培養液，進行液體發酵，發酵溫度為32～38℃，發酵初始pH值味7.0～7.5，發酵時間為12～36h，所述枯草芽孢桿菌菌種種子培養液種量占甲魚蛋混合液體積的3～8％；

（6）向經步驟（5）液體發酵處理后的甲魚蛋混合液中加入乳酸菌菌種種子培養液，進行液體靜止發酵，發酵溫度為37～47℃，發酵初始pH值味6.0～6.5，發酵時間為12～24h，所述乳酸菌菌種種子培養液種量占甲魚蛋混合液體積的3～8％；

（7）將經步驟（6）液體靜止發酵處理后的甲魚蛋混合液升溫至70～98℃，維持10～20min，使菌種失活；冷卻至室溫，即得抗氧化肽液，灌裝保存。

優選地，在步驟（5）液體發酵期間不斷攪拌、供氧。

優選地，步驟（5）所述枯草芽孢桿菌菌種種子培養液的制備方法如下：將活化好的枯草芽孢桿菌斜面菌種單菌落接入滅菌后的種子培養基中，于旋轉搖床180～200r/min、32～38℃恒溫振蕩培養20～24h；所述種子培養基組分為：蛋白胨30g /L、NaCl 5g /L、牛肉膏5g/L及葡萄糖1g /L、pH 7.2，若種子培養基為固體培養基則還添加瓊脂 2.5g/L。種子培養基于121℃下滅菌20min，冷卻即可。