[發明專利]具有抑制癌細胞作用的金槍魚提取物的制備方法

在審

• 申請號: 201710528629.7
• 申請日: 2017-07-01
• 公開（公告）號: CN107267583A
• 公開（公告）日: 2017-10-20
• 發明（設計）人: 劉洋
• 申請（專利權）人: 浦江縣泰如食品科技有限公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/16;C07K1/30;C07K1/34
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務所(普通合伙)11548
• 代理人: 李靜

1.具有抑制癌細胞作用的金槍魚提取物的制備方法，包括復合酶酶解、等電點沉淀、超濾和納濾、HPLC洗脫和冷凍干燥，其特征在于：所述的復合酶酶解步驟為采用海洋氧化短桿菌產堿性蛋白酶和裙帶菜蛋白酶酶解金槍魚魚肉勻漿液，并采用超聲波輔助酶解。

2.根據權利要求1所述的具有抑制癌細胞作用的金槍魚提取物的制備方法，其特征在于：所述的金槍魚提取物中含有氨基酸序列為HSHACASYYCRCLVLHPCVNCYCRCSR的活性短肽。

3.根據權利要求1所述的具有抑制癌細胞作用的金槍魚提取物的制備方法，其特征在于：所述的復合酶酶解步驟中海洋氧化短桿菌產堿性蛋白酶和裙帶菜蛋白酶的加入量為1~2wt%，酶解溫度為25~35℃，pH為7.0~9.0，酶解時間為50~70min。

4.根據權利要求1所述的具有抑制癌細胞作用的金槍魚提取物的制備方法，其特征在于：所述的等電點沉淀步驟為調節酶解液的pH為6.0~6.5，靜置后離心取沉淀。

5.根據權利要求1所述的具有抑制癌細胞作用的金槍魚提取物的制備方法，其特征在于：所述的超濾和納濾步驟為用純水將等電點沉淀得到的沉淀溶解，先用2-4kDa的超濾膜加壓超濾，再用納濾膜納濾去鹽，濃縮濾液。

6.根據權利要求1所述的具有抑制癌細胞作用的金槍魚提取物的制備方法，其特征在于：所述的HPLC洗脫步驟中洗脫步驟為0~5min，用1~3%三氟乙酸和98~99%乙腈洗脫，流速為0.8~1.5ml/min；5~15min，用5~7%三氟乙酸和93~95%乙腈洗脫，流速為0.8~1.5ml/min；15~30min，用8~12%三氟乙酸和88~92%乙腈洗脫，流速為0.8~1.5ml/min。

7.根據權利要求1所述的具有抑制癌細胞作用的金槍魚提取物的制備方法，其特征在于：所述的HPLC洗脫步驟中洗脫結束后收集在250nm有吸收的洗脫物，合并并濃縮。

8.根據權利要求1所述的具有抑制癌細胞作用的金槍魚提取物的制備方法，其特征在于：所述的冷凍干燥步驟為：預凍：-35~-45℃預凍3~5h；冷凍干燥：-45~-35℃，0~4Pa冷凍干燥5~7h，-10~-5℃，6~14Pa冷凍干燥1~2h；升華干燥：13~20℃，50~60Pa升華干燥2~3h；解析干燥：5~10℃，3~5Pa解析干燥2~4h，得到金槍魚提取物。

9.根據權利要求1所述的具有抑制癌細胞作用的金槍魚提取物的制備方法，其特征在于：所述的冷凍干燥前加入40~50wt%輔料，輔料為甘露醇。