[發(fā)明專利]一種具有良好熱穩(wěn)定性的葡萄糖氧化酶納米凝膠的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710527207.8
• 申請日: 2017-06-30
• 公開（公告）號: CN107164359B
• 公開（公告）日: 2020-03-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陶倩;柏良久;李桂英;薛眾鑫;王文香
• 申請（專利權(quán)）人: 魯東大學(xué)
• 主分類號: C12N11/082
• 分類號: C12N11/082;C12N11/04
• 代理公司: 煙臺上禾知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 37234
• 代理人: 鄭素娟

1.一種具有良好熱穩(wěn)定性的葡萄糖氧化酶納米凝膠的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)稱取單體、交聯(lián)劑和葡萄糖氧化酶溶解于MES緩沖溶液中制得混合溶液作為水相，控制水相中葡萄糖氧化酶的濃度為0.1-10mg/mL，所述單體與葡萄糖氧化酶的質(zhì)量之比為(100-250):1，交聯(lián)劑的量為單體質(zhì)量的1-3wt％，其中，所述單體是指N-異丙基丙烯酰胺或甲基丙烯酸N,N'-二甲氨基乙酯，所述的交聯(lián)劑是指N,N'-亞甲基雙丙烯酰胺、N,N'-乙烯基雙丙烯酰胺、二甲基丙烯酸乙二醇酯、二甲基丙烯酸二甘醇酯中的任意一種；

2)將表面活性劑加入到不溶于水的非極性或弱極性有機溶劑中，溶解后作為油相，所述的表面活性劑為二(2-乙基己基)琥珀酸酯磺酸鈉、聚乙二醇對異辛基苯基醚或十六烷基三甲基溴化銨中的任意一種；

3)在攪拌條件下，將水相逐滴加入到油相中，持續(xù)攪拌，得透明穩(wěn)定的微乳液體系，控制水相與油相的體積比為1:5-1:50，且微乳液中W₀值為20；

4)向步驟3)所得的微乳液體系中加入水溶性的引發(fā)劑，引發(fā)聚合反應(yīng)并進一步交聯(lián)，控制反應(yīng)溫度為20-30℃，反應(yīng)時間為0.5-4h，形成包裹有葡萄糖氧化酶的納米凝膠，所述引發(fā)劑包括還原組分和氧化組分，還原組分的加入量為單體質(zhì)量的0.5-0.75wt％，氧化組分的加入量為還原組分質(zhì)量的1-4倍，所述還原組分是指亞硫酸鹽和亞鐵鹽中的任意一種，所述氧化組分是指過硫酸鹽、過氧化氫中的一種；

5)聚合反應(yīng)結(jié)束后，向反應(yīng)體系中加入MES緩沖溶液，打破反應(yīng)體系中的油水平衡，冷藏靜置，待油水界面清晰后去除油相，將水相轉(zhuǎn)移進透析袋中，將透析袋中的產(chǎn)品至于MES緩沖溶液中透析48h以上，以去除表面活性劑和殘余單體，即得葡萄糖氧化酶納米凝膠；

其中，所述MES緩沖溶液是指2-(N-嗎啡啉)乙磺酸緩沖溶液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟1)中所述的交聯(lián)劑是指水溶性的具有雙官能團的交聯(lián)劑。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟5)中加入MES緩沖溶液的體積為水相體積的3-8倍。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項所述的制備方法，其特征在于，步驟2)中所述的有機溶劑為正己烷，環(huán)己烷，異辛烷，甲苯，石油醚中的任意一種。