[發明專利]一種高存活率的細胞復蘇方法

在審

• 申請號: 201710527030.1
• 申請日: 2017-06-30
• 公開（公告）號: CN107217031A
• 公開（公告）日: 2017-09-29
• 發明（設計）人: 王文峰;曹先艷;馬瑩
• 申請（專利權）人: 太倉東潯生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 蘇州市方略專利代理事務所(普通合伙)32267
• 代理人: 馬廣旭

1.一種高存活率的細胞復蘇方法，其特征在于：包括以下步驟：將凍存的細胞凍存管從液氮或者-80℃冰箱中取出，在取出后1min內于37℃搖晃至含有細胞凍存液的細胞液完全融化，將細胞液加入到盛有2-3ml新鮮培養基的離心管中，用移液槍上下吹打20-30次，于1000-1500g/min的轉速下離心3-10min；移去上清液，加入1-2ml的新鮮培養基，用移液槍上下吹打40-50次，然后均勻的加入到盛有7-9ml的新鮮培養基的細胞培養皿中，于37℃，5%CO₂培養箱中培養。

2.根據權利要求1所述的高存活率的細胞復蘇方法，其特征在于：所述培養基包括70-90%的基礎培養基以及10-30%的胎牛血清。

3.根據權利要求1所述的高存活率的細胞復蘇方法，其特征在于：所述細胞凍存液以重量組分計，包括以下組分：二甲基亞砜5-15份、羥乙基淀粉2-5份、殼聚糖5-10份、谷胱甘肽2-5份、維生素C1-4份、右旋糖酐0.3-4份、丙二醇0.5-2份、N-(苯甲基)-2-(4-嘧啶氨基)-4-噻唑甲酰胺0.1-1份和基礎培養基80-90份。

4.根據權利要求2或3所述的高存活率的細胞復蘇方法，其特征在于：所述基礎培養基以重量組分計，包括以下組分：葡萄糖 82-88份、碳酸氫鈉12-25份、丙酮酸鈉10-16份、絲膠蛋白5-9份、氯化鉀35-45份、無水硫酸鎂 6-10份、氯化鈉70-78份、無水磷酸二氫鈉10-14份、葉酸 0.3-0.5份、肌醇0.8-1.2份、煙酰胺0.3-0.6份、無水氯化鈣25-35份、硝酸鐵0.2-0.4份、丁二酸6-8份、丁二酸鈉12-16份、D-泛酸鈣 0.3-0.6份、酒石酸膽堿0.6-0.8份、核黃素0.1-0.3份、鹽酸硫胺0.2-0.4份、鹽酸吡哆辛 0.3-0.5份、N-異丙基丙烯酰胺0.2-0.4份、亞麻酸1-2份、乙醇胺0.6-0.8份、芳香酸酯0.3-0.8份、酚紅鈉1-1.3份和去離子水100份。

5.根據權利要求4所述的高存活率的細胞復蘇方法，其特征在于：所述基礎培養基還包括3-8份氨基酸，所述氨基酸以重量組分計，由以下組分組成：L-鹽酸精氨酸 5-10份、L-鹽酸胱氨酸 3-8份、L-絲氨酸3-6份、甘氨酸1-5份、L-鹽酸組氨酸 4-6份、L-異亮氨酸8-20份、L-亮氨酸7-18份、L-鹽酸賴氨酸10-20份、L-甲硫氨酸1-6份、L-苯丙氨酸2-8份、L-蘇氨酸5-15份、L-色氨酸1-3份、L-酪氨酸5-9份和L-纈氨酸8-12份。

6.根據權利要求5所述的高存活率的細胞復蘇方法，其特征在于：所述基礎培養基還包括2-5份輔助因子，所述輔助因子以重量組分計，由以下組分組成：重組人堿性成纖維細胞生長因子2-10份、白介素2 3-8份、白介素4 3-6份、白介素14 1-5份、IFN-γ3-6份和神經白細胞素1-4份。

7.根據權利要求6所述的高存活率的細胞復蘇方法，其特征在于：所述基礎培養基以重量組分計，還包括0.006份青霉素和0.01份的鏈霉素。

8.根據權利要求7所述的高存活率的細胞復蘇方法，其特征在于：所述青霉素選自10000U/ml，所述鏈霉素選自10000μg/ml。

9.根據權利要求1所述的高存活率的細胞復蘇方法，其特征在于：所述細胞培養皿為10cm細胞培養皿。