[發明專利]一種MDA?MB?231乳腺癌細胞的復蘇方法

在審

• 申請號: 201710527024.6
• 申請日: 2017-06-30
• 公開（公告）號: CN107164329A
• 公開（公告）日: 2017-09-15
• 發明（設計）人: 曹先艷;王文峰;施亮
• 申請（專利權）人: 太倉東潯生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09
• 代理公司: 蘇州市方略專利代理事務所(普通合伙)32267
• 代理人: 馬廣旭

技術領域

本發明屬于生物技術應用領域，具體地，涉及一種MDA-MB-231乳腺癌細胞的復蘇方法。

背景技術

乳腺癌是女性最常見的癌癥，主要包括導管癌和小葉癌。2016年美國CA（A Cancer Journal for Clinicians）公布的最新統計數據顯示，美國2016年預計將有420840例女性患乳腺癌，占女性新發惡性腫瘤的38%，居女性惡性腫瘤發病率第一位，并且死亡人數將達52930例。更為嚴重的是全球的乳腺癌發病率正在逐年增長。

細胞培養是生物與健康相關研究領域的一項重要技術。隨著生命科學的迅速發展，目前細胞培養已成為細胞生物學、分子生物學、遺傳學和免疫學等學科研究的重要基礎。為了深入探討細胞的生長活動規律、有關疾病的病理和藥物的藥理（毒理）機制，開發具有不同針對性的細胞培養方法具有重要意義。

其中，MDA-MB-231乳腺癌細胞作為人源性高轉移乳腺癌細胞，常用于乳腺癌的體內外研究。細胞復蘇是培養細胞的一種，是生命及再生醫學領域中廣泛應用的關鍵技術，在研究中往往需要對凍存的細胞進行復蘇，從而進行乳腺癌轉移的相關研究。

本發明所述的MDA-MB-231乳腺癌細胞的復蘇方法穩定性高，能夠去除凍存劑對復蘇后細胞生長的影響，復蘇后的MDA-MB-231乳腺癌細胞存活率高，細胞生長速度快，細胞狀態好，邊界清晰，可以有利于乳腺癌轉移的相關研究。

發明內容

發明目的：本發明提供了一種MDA-MB-231乳腺癌細胞的復蘇方法。

技術方案：本發明提供了一種MDA-MB-231乳腺癌細胞的復蘇方法，包括以下步驟：將凍存的MDA-MB-231乳腺癌細胞凍存管從液氮或者-80℃冰箱中取出，在取出后1min內于37℃搖晃至含有MDA-MB-231乳腺癌細胞專用凍存液的MDA-MB-231乳腺癌細胞液完全融化，將MDA-MB-231乳腺癌細胞液加入到盛有2-3ml新鮮MDA-MB-231乳腺癌細胞專用培養基的離心管中，用移液槍上下吹打20-30次，于1000-1500g/min的轉速下離心3-10min；移去上清液，加入1-2ml的新鮮MDA-MB-231乳腺癌細胞專用培養基，用移液槍上下吹打40-50次，然后均勻的加入到盛有7-9ml的新鮮MDA-MB-231乳腺癌細胞專用培養基的細胞培養皿中，于37℃，5%CO₂培養箱中培養；所述MDA-MB-231乳腺癌細胞專用凍存液以重量組分計，包括以下組分：二甲基亞砜5-15份、羥甲基淀粉2-5份、海藻糖3-12份、維生素E0.5-3份、25%山梨醇1-5份、丙二醇0.8-1.6份、(S)-(-)-1-(4-氟異喹啉-5-基)磺酰基-2-甲基-1,4-二氮環庚烷0.5-2份和基礎培養基80-90份。本發明所述的MDA-MB-231乳腺癌細胞的復蘇方法穩定性高，能夠去除凍存劑對復蘇后細胞生長的影響，復蘇后的MDA-MB-231乳腺癌細胞存活率高，細胞生長速度快，細胞狀態好，邊界清晰，可以有利于乳腺癌轉移的相關研究。同時，MDA-MB-231乳腺癌細胞專用凍存液對細胞損傷上，25%山梨醇為滲透性保護液，而(S)-(-)-1-(4-氟異喹啉-5-基)磺酰基-2-甲基-1,4-二氮環庚烷則抑制細胞活動和基因表達，維生素E的抗氧化性好，在保證休眠細胞的營養的同時還可以顯著減少對細胞的損傷，提高凍存細胞的存活率，并且在增殖方面也保持很好的狀態。

進一步的，上述的MDA-MB-231乳腺癌細胞的復蘇方法，所述MDA-MB-231乳腺癌細胞專用培養基包括70-90%的基礎培養基以及10-30%的胎牛血清。MDA-MB-231乳腺癌細胞專用培養基，組分合理，可以進一步為復蘇的細胞的提供營養物質。