[發(fā)明專利]一種MDA?MB?231乳腺癌細(xì)胞的復(fù)蘇方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710527024.6
• 申請日: 2017-06-30
• 公開（公告）號: CN107164329A
• 公開（公告）日: 2017-09-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曹先艷;王文峰;施亮
• 申請（專利權(quán)）人: 太倉東潯生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09
• 代理公司: 蘇州市方略專利代理事務(wù)所(普通合伙)32267
• 代理人: 馬廣旭

1.一種MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞的復(fù)蘇方法，其特征在于：包括以下步驟：將凍存的MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞凍存管從液氮或者-80℃冰箱中取出，在取出后1min內(nèi)于37℃搖晃至含有MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞專用凍存液的MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞液完全融化，將MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞液加入到盛有2-3ml新鮮MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基的離心管中，用移液槍上下吹打20-30次，于1000-1500g/min的轉(zhuǎn)速下離心3-10min；移去上清液，加入1-2ml的新鮮MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基，用移液槍上下吹打40-50次，然后均勻的加入到盛有7-9ml的新鮮MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，于37℃，5%CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；所述MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞專用凍存液以重量組分計(jì)，包括以下組分：二甲基亞砜5-15份、羥甲基淀粉2-5份、海藻糖3-12份、維生素E0.5-3份、25%山梨醇1-5份、丙二醇0.8-1.6份、(S)-(-)-1-(4-氟異喹啉-5-基)磺酰基-2-甲基-1,4-二氮環(huán)庚烷0.5-2份和基礎(chǔ)培養(yǎng)基80-90份。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞的復(fù)蘇方法，其特征在于：所述MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基包括70-90%的基礎(chǔ)培養(yǎng)基以及10-30%的胎牛血清。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞的復(fù)蘇方法，其特征在于：所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基以重量組分計(jì)，包括以下組分：葡萄糖 82-88份、碳酸氫鈉 12-25份、丙酮酸鈉10-16份、脂肪酸白蛋白6-12份、氯化鉀35-45份、無水硫酸鎂 6-10份、氯化鈉70-78份、無水磷酸二氫鈉10-14份、葉酸 0.3-0.5份、肌醇0.8-1.2份、煙酰胺0.3-0.6份、無水氯化鈣25-35份、硝酸鐵0.2-0.4份、丁二酸6-8份、丁二酸鈉12-16份、D-泛酸鈣 0.3-0.6份、N-異丙基甲基丙烯酰胺0.4-0.6份、酒石酸膽堿0.6-0.8份、核黃素0.1-0.3份、鹽酸硫胺0.2-0.4份、鹽酸吡哆辛 0.3-0.5份、L-丙酰胺-L-谷氨二肽0.4-0.8份、乙酸酯1.5-2份、生物素0.6-0.8份、硫辛酸0.4-0.7份、酚紅鈉1-1.3份和去離子水100份。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞的復(fù)蘇方法，其特征在于：所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基還包括3-8份氨基酸，所述氨基酸以重量組分計(jì)，由以下組分組成：L-鹽酸精氨酸 5-10份、L-鹽酸胱氨酸 3-8份、L-絲氨酸3-6份、甘氨酸1-5份、L-鹽酸組氨酸 4-6份、L-異亮氨酸8-20份、L-亮氨酸7-18份、L-鹽酸賴氨酸10-20份、L-甲硫氨酸1-6份、L-苯丙氨酸2-8份、L-蘇氨酸5-15份、L-色氨酸1-3份、L-酪氨酸5-9份和L-纈氨酸8-12份。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞的復(fù)蘇方法，其特征在于：所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基還包括2-5份輔助因子，所述輔助因子以重量組分計(jì)，由以下組分組成：胰島素生長因子3-8份、白介素6 2-5份、白介素10 1-4份、白介素12 3-6份、TNF-β2-10份、GM-CSF1-5份。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞的復(fù)蘇方法，其特征在于：所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基以重量組分計(jì)，還包括0.006份青霉素和0.01份的鏈霉素。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞的復(fù)蘇方法，其特征在于：所述青霉素選自10000U/ml，所述鏈霉素選自10000μg/ml。