[發(fā)明專利]一種鑒定番茄果實干汁性狀的差異性序列及其分子標(biāo)記物與鑒定方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710524590.1
• 申請日: 2017-06-30
• 公開（公告）號: CN107354150B
• 公開（公告）日: 2020-04-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉磊;李君明;舒金帥;朱慶寶;鄧學(xué)斌;馮晶晶;白金瑞
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/6895
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11548
• 代理人: 黃玉玨

本發(fā)明公開了一種番茄果實干汁性狀的差異性序列，該序列如SEQ ID NO：1所示，還提供了鑒定上述性狀的方法與分子標(biāo)記物，包括如核苷酸序列SEQ ID NO：2所示的上游引物，如核苷酸序列SEQ ID NO：3所示的下游引物，并提供了鑒定上述性狀的方法：(1)以待鑒定番茄的基因組DNA為模板，用所述分子標(biāo)記物進行PCR擴增；(2)對擴增產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳檢測，如果待鑒定番茄的PCR擴增產(chǎn)物含有如SEQ ID NO：1所示的DNA片段，則即可鑒定出該待鑒定番茄為有汁番茄，反之則為干汁番茄。利用本發(fā)明進行番茄果實干汁性狀的分子標(biāo)記輔助選擇，可提高選擇效率，加快育種進程；本發(fā)明只需通過簡單的DNA提取、PCR特異性擴增、瓊脂糖凝膠電泳檢測即可完成對樣品的鑒別。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于遺傳學(xué)與生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體為番茄果實干汁性狀的差異性基因序列與及其分期標(biāo)記引物與鑒定方法。

背景技術(shù)

番茄具有較高的營養(yǎng)價值和經(jīng)濟價值，是重要的鮮食產(chǎn)品和加工原料，已成為繼玉米、水稻、小麥與馬鈴薯等之后的世界第七大作物，全球年工業(yè)產(chǎn)值可達500億美元。番茄果實不僅含有對人體有益的碳水化合物、纖維素和礦質(zhì)元素等，并且含有多種維生素，以及決定果實風(fēng)味的多種糖、有機酸和揮發(fā)性有機化合物。番茄因其重要的農(nóng)業(yè)價值、豐富的營養(yǎng)價值、優(yōu)越的植物學(xué)特性和基礎(chǔ)研究優(yōu)勢，成為研究肉質(zhì)果特別是肉質(zhì)漿果及其發(fā)育的模式植物。解釋了眾多果實的生理、發(fā)育和代謝等機理，如關(guān)于肉質(zhì)果實的器官發(fā)生、發(fā)育和成熟，以及感官品質(zhì)和營養(yǎng)的分子基礎(chǔ)等。

利用不斷發(fā)展的理論和技術(shù)，培育滿足生產(chǎn)和市場需求的優(yōu)良品種，是番茄育種的根本目的。隨著遺傳學(xué)的發(fā)展，遺傳標(biāo)記的得到廣泛應(yīng)用和推廣，分為形態(tài)標(biāo)記、細胞學(xué)標(biāo)記、生化標(biāo)記等表現(xiàn)型標(biāo)記和DNA片段標(biāo)記等基因型標(biāo)記。DNA片段標(biāo)記能夠直接反映生物個體或種群間基因組的某種差異，具有不受環(huán)境和基因表達的影響，而且具有數(shù)量豐富，遺傳穩(wěn)定，操作簡單等優(yōu)點。從20世紀(jì)80年代后期開始，分子標(biāo)記輔助選擇技術(shù)和基因工程技術(shù)為核心的生物育種技術(shù)得到了快速的發(fā)展。常用的分子標(biāo)記有基于Southern雜交的限制性片段長度多態(tài)性標(biāo)記(RFLP)，基于PCR技術(shù)的DNA擴增方法的隨機擴增多態(tài)性DNA標(biāo)記(RAPD)，特定序列擴增標(biāo)記(SCAR)和簡單重復(fù)序列標(biāo)記(SSR)，以及基于PCR與酶切相結(jié)合的擴增片段長度多態(tài)性標(biāo)記(AFLP)、切割擴增的多態(tài)性序列標(biāo)記(CAPS)和單核苷酸多態(tài)性(SNP)等。PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的英文縮寫(Polymerase Chain Reaction)，PCR反應(yīng)可以擴增一個DNA片段。PCR技術(shù)已經(jīng)被廣泛用于生物學(xué)、分子生物學(xué)、生物化學(xué)、生物醫(yī)學(xué)等學(xué)科。

普通番茄成熟后，果實心室組織發(fā)育成凝膠狀的心室膠狀物(loculargel)。心室膠狀物是番茄等肉質(zhì)漿果的典型特征，對果實的形成、發(fā)育、風(fēng)味組成與質(zhì)地變化等均發(fā)揮著重要作用。心室膠狀物作為番茄果實中除果皮外的第二大豐富組織，是風(fēng)味品質(zhì)的重要構(gòu)成因素。干汁番茄材料(allflesh，alf)果實不形成心室膠狀物，果實仍能正常發(fā)育成熟，干汁番茄果實干物質(zhì)含量高，可提高果實的耐貯運性，減緩番茄切片的降解速度，用于制干番茄及漢堡夾心等。干汁番茄材料的研究可為深入理解番茄風(fēng)味品質(zhì)的形成及遺傳改良提供理論依據(jù)，并可為解析番茄果實心室膠狀物的形成和發(fā)育的分子機制奠定基礎(chǔ)。然而，現(xiàn)有技術(shù)中采用分子技術(shù)直接鑒定番茄是否為干汁番茄卻顯有報道。

發(fā)明內(nèi)容

為解決現(xiàn)有技術(shù)中上述問題，本發(fā)明提供了番茄果實干汁性狀的差異性序列及其分子標(biāo)記物與鑒定方法，實現(xiàn)的目的為，提供一種在番茄苗期快速篩選和鑒定番茄果實干汁性狀的方法和檢測技術(shù)，可于植株早期快速穩(wěn)定地篩選和鑒定番茄果實的干汁性狀。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明公開的技術(shù)方案為：本發(fā)明提供了一種番茄果實干汁性狀的差異性序列，該序列如SEQ ID NO：1所示。

本發(fā)明還公開了鑒定番茄果實干汁性狀的分子標(biāo)記物，該分子標(biāo)記物包括上游引物、下游引物，上游引物的的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，下游引物的核苷酸序列如SEQID NO：3。