[發(fā)明專利]一種鑒定番茄果實(shí)干汁性狀的差異性序列及其分子標(biāo)記物與鑒定方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710524590.1
• 申請(qǐng)日: 2017-06-30
• 公開（公告）號(hào): CN107354150B
• 公開（公告）日: 2020-04-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉磊;李君明;舒金帥;朱慶寶;鄧學(xué)斌;馮晶晶;白金瑞
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所
• 主分類號(hào): C12N15/11
• 分類號(hào): C12N15/11;C12Q1/6895
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11548
• 代理人: 黃玉玨

1.一種番茄果實(shí)干汁性狀的差異性序列，其特征在于，該序列如SEQ ID NO：1所示。

2.一種鑒定番茄果實(shí)干汁性狀的引物，其特征在于，該引物包括上游引物和下游引物，上游引物的的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。

3.一種鑒定番茄果實(shí)干汁性狀的方法，其特征在于，該方法包括如下步驟：

(1)以包含待鑒定番茄的基因組DNA為模板、權(quán)利要求2所示核苷酸序列的引物的擴(kuò)增試劑盒進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到其擴(kuò)增產(chǎn)物；

(2)對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)，如果待鑒定番茄的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物含有權(quán)利要求1如SEQ IDNO：1所示的DNA片段，則即可鑒定出該待鑒定番茄為普通有汁番茄，反之則為干汁番茄。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述鑒定番茄果實(shí)干汁性狀的方法，其特征在于，所述步驟(1)中PCR反應(yīng)溫度程序是：4℃預(yù)變性4min；94℃變性30s，58℃退火30s，72℃延伸1min，30個(gè)循環(huán)；72℃延伸8min。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述鑒定番茄果實(shí)干汁性狀的方法，其特征在于，所述步驟(2)中對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，電泳條帶僅顯示446bp條帶，則所述待鑒定番茄為干汁番茄。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述鑒定番茄果實(shí)干汁性狀的方法，其特征在于，所述步驟(2)中對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，電泳條帶顯示862bp條帶或顯示862bp與446bp兩個(gè)條帶，所述待鑒定番茄為有汁番茄。

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述鑒定番茄果實(shí)干汁性狀的方法，其特征在于，所述步驟(1)中擴(kuò)增試劑盒包括：

所述待鑒定番茄的基因組DNA模板的質(zhì)量濃度為25ng/μl，上游引物的質(zhì)量濃度為50ng/μl，下游引物的質(zhì)量濃度為50ng/μl，dNTPs混合物的濃度摩爾質(zhì)量濃度為10mM，MgC1₂溶液的摩爾質(zhì)量濃度為25mM，Taq DNA聚合酶的質(zhì)量濃度為5U/μl，以上組成試劑盒的各成分質(zhì)量濃度、摩爾濃度均為各成分溶解于相對(duì)應(yīng)溶劑的質(zhì)量濃度、摩爾濃度。