[發(fā)明專利]酵素產(chǎn)品中花青素的快速檢測方法

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• 申請日: 2017-06-30
• 公開（公告）號: CN107340248A
• 公開（公告）日: 2017-11-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張萌
• 申請（專利權(quán)）人: 張萌
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31
• 代理公司: 北京聯(lián)瑞聯(lián)豐知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)11411
• 代理人: 周超

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于花青素檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及酵素產(chǎn)品中花青素的快速檢測方法。

背景技術(shù)

酵素產(chǎn)品是以植物性材料為原料，經(jīng)過微生物發(fā)酵，含有活性成分的一類產(chǎn)品，目前市場上按照原料分類可以分為多種酵素產(chǎn)品，而每一種酵素產(chǎn)品含有其特殊的活性成分，其中花青素就屬于其中一類，那么對花青素的定量檢測技術(shù)就成為關(guān)鍵的部分。

目前花青素的測定方法有可見分光光度法、HPLC分析法、鹽酸/香草醛法。對于葡萄中的花青素的測定方法，傳統(tǒng)的分光光度法是KMnO4分光光度計(jì)法，該方法基于花青素結(jié)構(gòu)中含有還原性基因，能夠在強(qiáng)酸性介質(zhì)中與KMnO4發(fā)生氧化還原反應(yīng)，在545nm吸光度值減少而在310nm處吸光度值增加，通過A310/A545的比值來測定花青素。采用高效液相的方式進(jìn)行檢測，但其檢測時(shí)間長，比較適用于成品狀態(tài)。對于酵素生產(chǎn)過程中的花青素含量檢測并不適用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提出一種酵素產(chǎn)品中花青素的快速檢測方法，該方法能夠快速測得酵素生產(chǎn)過程中的花青素，結(jié)果比較準(zhǔn)確。

本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的：

一種酵素產(chǎn)品中花青素的快速檢測方法，包括以下步驟：

1)標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：稱取花青素的標(biāo)準(zhǔn)品溶于水中制備得到花青素溶液，用堿性溶液滴定花青素溶液至pH為9.2±0.01，再吸取調(diào)節(jié)好pH的花青素溶液配制成不同濃度梯度的稀釋液，以純水作為對照，在270～280nm范圍內(nèi)測吸光值，計(jì)算得到標(biāo)準(zhǔn)曲線及相應(yīng)的回歸方程；

2)樣品測定：取待測酵素樣品，用純水進(jìn)行稀釋得到吸收后的酵素溶液，用堿性溶液滴定酵素溶液的pH為9.2±0.01，以純水作為對照，測定在270～280nm范圍內(nèi)測吸光值，將測得的吸光值帶入回歸方程中計(jì)算結(jié)果并乘以稀釋倍數(shù)即可。

優(yōu)選地，所述步驟1)與步驟2)的堿性溶液均為氫氧化鈉溶液或者氫氧化鉀溶液。

本發(fā)明的有益效果：

本發(fā)明快速檢測方法利用花青素pH為9.2±0.01溶液中，在270～280nm范圍內(nèi)有特定的吸收峰，可以很快準(zhǔn)確獲知待測樣品中的花青素濃度。

具體實(shí)施方式

一種酵素產(chǎn)品中花青素的快速檢測方法：

1)標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：

稱取花青素標(biāo)準(zhǔn)品2.5g溶于50mL水中，用1mol/L的氫氧化鈉溶液滴定至pH＝9.2±0.01，吸取該溶液0.1、0.25、0.5、1.0、1.5mL置于10mL棕色容量瓶中(最終濃度分別為0.5、1.25、2.5、5、7.5mg/mL)，加水至刻度，搖勻，即得花青素工作液。各取2mL，以純水為對照，于270～280nm范圍內(nèi)測吸光值，以花青素和吸光值為坐標(biāo)軸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得回歸方程為Y＝18.866X-7.6676R2＝0.9961，Y-花青素濃度，X-吸光值。

2)樣品測定

選擇藍(lán)莓酵素作為待測樣品，量取50mL待測樣品，邊攪拌邊滴定，用1mol/L的氫氧化鈉溶液滴定至pH＝9.2±0.01，取2ml樣品，以純水為對照，于270～280nm范圍內(nèi)測吸光值為0.82，將測得的吸光值代入到回歸方程中計(jì)算結(jié)果，并乘以稀釋倍數(shù)得到最終結(jié)果為7.82mg/ml,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差5％，回收率86％檢測用時(shí)30分鐘。

對照實(shí)驗(yàn)：

選取同一藍(lán)莓酵素樣品，參考采用《保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范》(2003版)中保健食品中原花青素測定的方法，測得樣品含量8.34mg/ml,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差7％，回收率95％，檢測用時(shí)150分鐘。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。