[發(fā)明專利]利用異養(yǎng)培養(yǎng)平滑菱形藻生產(chǎn)巖藻黃素的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710523735.6
• 申請日: 2017-06-30
• 公開（公告）號: CN107099564A
• 公開（公告）日: 2017-08-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳峰;盧雪;劉賓
• 申請（專利權(quán)）人: 北京大學(xué)
• 主分類號: C12P17/02
• 分類號: C12P17/02;C12N1/12;C12R1/89
• 代理公司: 石家莊海天知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司13101
• 代理人: 田文其

1.利用異養(yǎng)培養(yǎng)平滑菱形藻生產(chǎn)巖藻黃素的方法，其特征在于包括如下步驟：

A、種子液的制備

將活化好的平滑菱形藻置于無菌種子培養(yǎng)基中異養(yǎng)培養(yǎng)3-11天制成種子液，使平滑菱形藻細胞處于對數(shù)生長期；

B、發(fā)酵培養(yǎng)

將步驟A中的種子液按照體積比為3％-20％的接種量轉(zhuǎn)接入無菌發(fā)酵培養(yǎng)基中進行搖床培養(yǎng)制備發(fā)酵液，培養(yǎng)溫度20℃-30℃，培養(yǎng)周期3-11天；

所述的種子培養(yǎng)基及發(fā)酵培養(yǎng)基包括如下含量范圍的原料：

NaCl 10g/L-32g/L；MgSO₄·7H₂O 1.09g/L-2.18g/L；CaCl₂·2H₂O 0.1g/L-0.27g/L；KH₂PO₄ 0.031g/L-0.062g/L；K₂HPO₄ 0.00375g/L-0.0075g/L；FeCl₃·6H₂O 0.291mg/L-0.582mg/L；MnCl₂·4H₂O 0.025mg/L-0.246mg/L；ZnCl₂0.031mg/L-0.311mg/L；CoCl₂·6H₂O 0.0114mg/L-0.0228mg/L；Na₂MoO₄·2H₂O0.012mg/L-0.024mg/L；H₃BO₃ 3.06g/L-30.56g/L；(NH₄)₆MO₇O₂₄·4H₂O 0.028mg/L-0.278mg/L；Tris-buffer 0.089g/L-0.892g/L；H₂SO₄ 1.64μg/L-16.4μg/L；vitamin B₁₂ 1.5g/L-15×10^-5g/L；biot in 2.5g/L-25×10^-5g/L；有機碳源2g/L-50g/L；氮源0.4g/L-7g/L；硅酸鹽20mg/L-700mg/L；pH＝6-9；

所述有機碳源包括但不限限于：葡萄糖、淀粉水解物、果葡糖漿、蔗糖或其組合；所述氮源選用有機氮源、無機氮源或其組合，其中有機氮源包括但不限于：酵母膏、蛋白胨、酵母提取物、氨基酸、尿素、蛋白水解物或其組合，無機氮源包括但不限于選用硝酸鉀、硝酸鈉、氯化銨、碳酸氫銨或其組合；所述硅酸鹽包括但不限于硅酸鈉、硅酸鉀、硅酸氨或其組合；

所述的平滑菱形藻選自平滑菱形藻(Nitzschia laevis)UTEX 2047、平滑菱形藻(Nitzschia laevis)CCMP 559、平滑菱形藻(Nitzschia laevis)CCMP 1092、平滑菱形藻(Nitzschia laevis)O-7；

C、從步驟B發(fā)酵結(jié)束后的發(fā)酵液中提取巖藻黃素。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用異養(yǎng)培養(yǎng)平滑菱形藻生產(chǎn)巖藻黃素的方法，其特征在于所述的步驟B搖床培養(yǎng)過程中搖床轉(zhuǎn)速為100-240轉(zhuǎn)/分鐘。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2中任一項所述的利用異養(yǎng)培養(yǎng)平滑菱形藻生產(chǎn)巖藻黃素的方法，其特征在于種子培養(yǎng)基及發(fā)酵培養(yǎng)基中氮源選用如下含量范圍的原料：蛋白胨1g/L；有機碳源選用如下含量范圍的原料：葡萄糖5g/L。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2中任一項所述的利用異養(yǎng)培養(yǎng)平滑菱形藻生產(chǎn)巖藻黃素的方法，其特征在于種子培養(yǎng)基及發(fā)酵培養(yǎng)基中氮源選用如下含量范圍的原料：蛋白胨1g/L；有機碳源含量范圍如下：5g/L＜有機碳源含量≤50g/L。

5.根據(jù)權(quán)利要求1或2中任一項所述的利用異養(yǎng)培養(yǎng)平滑菱形藻生產(chǎn)巖藻黃素的方法，其特征在于種子培養(yǎng)基及發(fā)酵培養(yǎng)基中氮源選用如下含量范圍的原料：硝酸鉀或硝酸鈉0.4g/L-2g/L；有機碳源選用如下含量范圍的原料：葡萄糖5g/L。

6.根據(jù)權(quán)利要求1或2中任一項所述的利用異養(yǎng)培養(yǎng)平滑菱形藻生產(chǎn)巖藻黃素的方法，其特征在于種子培養(yǎng)基及發(fā)酵培養(yǎng)基中氮源選用如下含量范圍的原料：硝酸鈉1g/L；有機碳源選用如下含量范圍的原料：葡萄糖5g/L。