[發明專利]利用異養培養平滑菱形藻生產巖藻黃素的方法

在審

• 申請號: 201710523735.6
• 申請日: 2017-06-30
• 公開（公告）號: CN107099564A
• 公開（公告）日: 2017-08-29
• 發明（設計）人: 陳峰;盧雪;劉賓
• 申請（專利權）人: 北京大學
• 主分類號: C12P17/02
• 分類號: C12P17/02;C12N1/12;C12R1/89
• 代理公司: 石家莊海天知識產權代理有限公司13101
• 代理人: 田文其

1.利用異養培養平滑菱形藻生產巖藻黃素的方法，其特征在于包括如下步驟：

A、種子液的制備

將活化好的平滑菱形藻置于無菌種子培養基中異養培養3-11天制成種子液，使平滑菱形藻細胞處于對數生長期；

B、發酵培養

將步驟A中的種子液按照體積比為3％-20％的接種量轉接入無菌發酵培養基中進行搖床培養制備發酵液，培養溫度20℃-30℃，培養周期3-11天；

所述的種子培養基及發酵培養基包括如下含量范圍的原料：

NaCl 10g/L-32g/L；MgSO₄·7H₂O 1.09g/L-2.18g/L；CaCl₂·2H₂O 0.1g/L-0.27g/L；KH₂PO₄ 0.031g/L-0.062g/L；K₂HPO₄ 0.00375g/L-0.0075g/L；FeCl₃·6H₂O 0.291mg/L-0.582mg/L；MnCl₂·4H₂O 0.025mg/L-0.246mg/L；ZnCl₂0.031mg/L-0.311mg/L；CoCl₂·6H₂O 0.0114mg/L-0.0228mg/L；Na₂MoO₄·2H₂O0.012mg/L-0.024mg/L；H₃BO₃ 3.06g/L-30.56g/L；(NH₄)₆MO₇O₂₄·4H₂O 0.028mg/L-0.278mg/L；Tris-buffer 0.089g/L-0.892g/L；H₂SO₄ 1.64μg/L-16.4μg/L；vitamin B₁₂ 1.5g/L-15×10^-5g/L；biot in 2.5g/L-25×10^-5g/L；有機碳源2g/L-50g/L；氮源0.4g/L-7g/L；硅酸鹽20mg/L-700mg/L；pH＝6-9；

所述有機碳源包括但不限限于：葡萄糖、淀粉水解物、果葡糖漿、蔗糖或其組合；所述氮源選用有機氮源、無機氮源或其組合，其中有機氮源包括但不限于：酵母膏、蛋白胨、酵母提取物、氨基酸、尿素、蛋白水解物或其組合，無機氮源包括但不限于選用硝酸鉀、硝酸鈉、氯化銨、碳酸氫銨或其組合；所述硅酸鹽包括但不限于硅酸鈉、硅酸鉀、硅酸氨或其組合；

所述的平滑菱形藻選自平滑菱形藻(Nitzschia laevis)UTEX 2047、平滑菱形藻(Nitzschia laevis)CCMP 559、平滑菱形藻(Nitzschia laevis)CCMP 1092、平滑菱形藻(Nitzschia laevis)O-7；

C、從步驟B發酵結束后的發酵液中提取巖藻黃素。

2.根據權利要求1所述的利用異養培養平滑菱形藻生產巖藻黃素的方法，其特征在于所述的步驟B搖床培養過程中搖床轉速為100-240轉/分鐘。

3.根據權利要求1或2中任一項所述的利用異養培養平滑菱形藻生產巖藻黃素的方法，其特征在于種子培養基及發酵培養基中氮源選用如下含量范圍的原料：蛋白胨1g/L；有機碳源選用如下含量范圍的原料：葡萄糖5g/L。

4.根據權利要求1或2中任一項所述的利用異養培養平滑菱形藻生產巖藻黃素的方法，其特征在于種子培養基及發酵培養基中氮源選用如下含量范圍的原料：蛋白胨1g/L；有機碳源含量范圍如下：5g/L＜有機碳源含量≤50g/L。

5.根據權利要求1或2中任一項所述的利用異養培養平滑菱形藻生產巖藻黃素的方法，其特征在于種子培養基及發酵培養基中氮源選用如下含量范圍的原料：硝酸鉀或硝酸鈉0.4g/L-2g/L；有機碳源選用如下含量范圍的原料：葡萄糖5g/L。

6.根據權利要求1或2中任一項所述的利用異養培養平滑菱形藻生產巖藻黃素的方法，其特征在于種子培養基及發酵培養基中氮源選用如下含量范圍的原料：硝酸鈉1g/L；有機碳源選用如下含量范圍的原料：葡萄糖5g/L。