[發明專利]血滯通膠囊的指紋圖譜及高效液相色譜鑒別方法

有效

• 申請號: 201710519636.0
• 申請日: 2017-06-30
• 公開（公告）號: CN107202853B
• 公開（公告）日: 2018-09-11
• 發明（設計）人: 李文革;楊德輝
• 申請（專利權）人: 吉林省東方制藥有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 北京思元知識產權代理事務所(普通合伙) 11598
• 代理人: 余光軍;霍雪梅

1.一種血滯通膠囊指紋圖譜的建立方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）將血滯通膠囊內容物加入50%甲醇為提取溶劑進行提取，得到提取液，純化，得到供試品溶液；

（2）將供試品溶液進行高效液相色譜分析，獲得高效液相色譜圖；所述高效液相色譜分析的色譜條件包括：色譜柱為Grace Apollo C₁₈色譜柱，規格為4.6mm×250mm，5μm；十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相A為水，B為甲醇，進行梯度洗脫；

所述梯度洗脫的程序包括：按體積百分比計，0-15min，A：95→85%，B：5→15%；15-20min，A：85→80%，B：15→20％；20-30min，A：80→60%，B：20→40％；30-45min，A：60→55%，B：40→45％；45-50min，A：55→95%，B：45→5％；

流速為0.8ml/min；柱溫為40℃；進樣量為10μl；檢測波長為220nm；

（3）從高效液相色譜圖的色譜峰中選擇共有峰，得到血滯通膠囊指紋圖譜；所述共有峰的選擇包括：在12min-45min時間區間內，從多批供試品溶液高效液相色譜圖中選擇四個色譜峰作為共有峰，分別標記為峰1、峰2、峰3及峰4；以紫丁香苷峰為標準峰，各共有峰的相對保留時間為：峰1的相對保留時間為0.515-0.593，峰2的相對保留時間為0.735-0.845，峰3的相對保留時間為1.000，峰4的相對保留時間為1.168-1.344；

其中，所述純化采用中性氧化鋁柱層析，所述中性氧化鋁柱層析純化包括：將提取液濾過，取續濾液，蒸干；將蒸干后得到的殘渣加50%甲醇溶解，加在中性氧化鋁柱上，用50%甲醇洗脫，收集流出液及洗脫液，蒸干；將蒸干后得到的殘渣用50%甲醇溶解，即得；其中，所述中性氧化鋁柱中的中性氧化鋁的用量為4g，所述中性氧化鋁的粒度為100-200目。

2.按照權利要求1所述的建立方法，其特征在于：按照g/ml計，步驟（1）中，血滯通膠囊內容物：50%甲醇=2：50；所述提取的方式為超聲提取30分鐘；其中，所述超聲的功率為250W，頻率為40KHZ。

3.一種血滯通膠囊的高效液相色譜鑒別方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）將待檢測血滯通膠囊內容物加入50%甲醇為提取溶劑進行提取，得到提取液，純化，得到供試品溶液；

（2）取腺苷和紫丁香苷對照品，分別制備對照品溶液；

（3）將供試品溶液與對照品溶液分別進行高效液相色譜分析，如果供試品溶液的高效液相色譜圖中同時出現與腺苷、紫丁香苷對照品的保留時間一致的色譜峰，則判定待檢測血滯通膠囊的質量合格；

步驟（3）所述高效液相色譜分析的色譜條件包括：色譜柱為Grace Apollo C₁₈色譜柱，規格為4.6mm×250mm，5μm；十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相A為水，B為甲醇，進行梯度洗脫；流速為0.8ml/min；柱溫為40℃；進樣量為10μl；檢測波長為220nm；

所述梯度洗脫的程序包括：按照體積百分比計，0-15min，A：95→85%，B：5→15%；15-20min，A：85→80%，B：15→20％；20-30min，A：80→60%，B：20→40％；30-45min，A：60→55%，B：40→45％；45-50min，A：55→95%，B：45→5％；

其中，所述純化采用中性氧化鋁柱層析；所述中性氧化鋁柱層析純化包括：將提取液濾過，取續濾液，蒸干；將蒸干后得到的殘渣加50%甲醇溶解，加在中性氧化鋁柱上，用50%甲醇洗脫，收集流出液及洗脫液，蒸干；將蒸干后得到的殘渣用50%甲醇溶解，即得；其中，所述中性氧化鋁柱中的中性氧化鋁的用量為4g，所述中性氧化鋁的粒度為100-200目。

4.按照權利要求3所述的高效液相色譜鑒別方法，其特征在于：步驟（1）中，按照g/ml計，血滯通膠囊內容物：50%甲醇=2：50；所述提取的方式為超聲提取30分鐘；其中，所述超聲的功率為250W，頻率為40KHZ；步驟（2）所述對照品溶液的制備包括：將腺苷和紫丁香苷對照品分別用50%甲醇溶解，使每1ml對照品溶液中含腺苷或紫丁香苷20μg。