[發明專利]使用免疫球蛋白片段的胰島素綴合物

在審

• 申請號: 201710519561.6
• 申請日: 2011-04-04
• 公開（公告）號: CN107325170A
• 公開（公告）日: 2017-11-07
• 發明（設計）人: 宋大海;申載熙;樸永振;任大成;裴城敏;權世昌
• 申請（專利權）人: 韓美科學株式會社
• 主分類號: C07K14/62
• 分類號: C07K14/62;C07K1/107;A61K38/28;A61K47/68;A61P3/10
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司11227
• 代理人: 鄭斌,尹玉峰

本申請是申請號為201180022035.X的中國專利申請的分案申請，原申請是2011年4月4日提交的PCT國際申請PCT/KR2011/002331于2012年10月31日進入中國國家階段的申請。

技術領域

本發明涉及具有改善的體內持續時間和穩定性的胰島素綴合物、包含該胰島素綴合物的長效制劑及其制備方法，該胰島素綴合物通過將胰島素與免疫球蛋白Fc區經非肽基聚合物共價連接而制備。本發明提供了用于在有胰島素缺陷病癥(如糖尿病)的對象中進行治療的方法。本發明的胰島素綴合物將肽的體內活性維持在相對高的水平，并顯著延長了其血清半衰期，從而極大地提高了對胰島素治療的藥物依從性。

背景技術

胰島素是由胰腺β細胞分泌的肽，它在控制機體的血糖水平中起著中心作用。當機體中胰島素分泌不正?；蛘咚置诘囊葝u素不起作用時，血糖水平不被調節，從而發生糖尿病。這種糖尿病被稱為II型糖尿病。當胰腺不產生足夠的胰島素從而使得血糖水平增加時導致I型糖尿病。

通常用化學合成的經口降血糖劑治療II型糖尿病，在一些情況下，用胰島素治療患者。而I型糖尿病則需要胰島素治療。

目前使用的胰島素治療方法是在飯前/飯后注射胰島素。但是，這樣的胰島素注射應當每天3次地連續施用，其導致患者疼痛或不適。為了克服這一問題已進行了許多嘗試。它們之一是通過提高肽類藥物的膜透過性從而經口或鼻吸入地遞送所述肽類藥物的方法。并不理想地，與注射劑相比，該方法示出非常低的遞送效率，因此，維持所需水平的肽類藥物體內活性仍然有許多困難。

同時，有一種在皮下注射大量藥物后延遲藥物吸收的方法，從而使得通過每日僅注射一次來維持血液水平。一些所開發的藥物(Sanofi-aventis)已得到許可并且目前被用于患者。此外，已進行研究以延長作用時間，從而開發出地特胰島素(Levemir)(Novo Nordisk)，其通過用脂肪酸修飾胰島素而制備，其中通過胰島素分子在注射部位的自締合或者通過可逆結合血液中的白蛋白產生長效作用。但是，這些方法在注射部位產生疼痛，并且每日注射也引起患者的極大不適。

已進行了許多努力以提高肽類藥物的血清穩定性以及在延長的時間中將血液中的藥物維持在高水平，從而使藥物的藥效最大化。肽類藥物的這些長效制劑需要提高肽類藥物的穩定性并將效價維持在足夠高的水平，而不會引起患者的免疫應答。就制備肽類藥物的長效制劑而言，按照常規使用具有高溶解度的聚合物(如聚乙二醇(PEG))來化學修飾肽類藥物的表面。

PEG非特異性地結合靶標肽的特定位點或多個位點以起到增加肽的分子量的作用，從而抑制通過腎的損失，并防止水解，而不引起任何副作用。例如，WO2006/076471描述了B型利鈉肽(B-type natriuretic peptide，BNP)，其與NPR-A結合從而激活cGMP的產生并引起動脈血壓降低，因此，BNP被用作充血性心力衰竭治療劑，它與PEG連接，從而保持其生理活性。美國專利第6,924,264號描述了PEG與艾塞那肽-4(exendin-4)的賴氨酸殘基結合從而增加了其體內駐留時間。這種方法增加了PEG的分子量，從而增加了肽類藥物的體內駐留時間。但是，隨著分子量的增加，肽類藥物的效價顯著降低，并且肽的反應性也降低了。因此，其不理想地降低了產率。

WO 02/46227描述了使用基因重組技術通過將GLP-1、艾塞那肽-4或其類似物與人血清白蛋白或免疫球蛋白片段(Fc)偶聯而制備的融合蛋白。美國專利第6,756,480號描述了通過將甲狀旁腺激素(PTH)和其類似物與Fc區偶聯而制備的Fc融合蛋白。這些方法可以解決如聚乙二醇化產量低和非特異性的問題，但是它們仍然具有這樣一個問題：增加血液半衰期的作用不像預期的那么顯著，并且在一些情況下，效價也低。為了使增加血液半衰期的作用最大化，使用了多種肽接頭，但是可能引起免疫應答。此外，如果使用具有二硫鍵的肽(如BNP)，那么錯誤折疊的可能性高，而如果使用具有非天然氨基酸殘基的肽，那么其可以通過基因重組產生，但難度很大。

發明內容

技術問題

鑒于此，進行了大量且深入的研究以開發能夠使胰島素的血清半衰期和體內活性同時實現最大化的方法，結果發現免疫球蛋白Fc區、非肽基聚合物和胰島素通過共價鍵彼此位點選擇性地相連接，從而與已知框內融合方法相比顯著增加了血清半衰期，得到了本發明。

解決方案