[發明專利]精血補片指紋圖譜的檢測方法

有效

• 申請號: 201710517640.3
• 申請日: 2017-06-29
• 公開（公告）號: CN107179374B
• 公開（公告）日: 2019-10-22
• 發明（設計）人: 金俊杰;蔡寶昌;趙敏;秦昆明;楊冰
• 申請（專利權）人: 江蘇海昇藥業有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/74;G01N30/86
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 楊海軍

1.一種精血補片指紋圖譜的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1、精血補片供試品溶液的制備：提供不同批次的精血補片供試品，分別取一定重量的供試品置于容器中，向容器中加入石油醚并進行超聲處理，冷卻，搖勻，過濾，取濾渣蒸干，然后加入甲醇超聲處理，冷卻，搖勻，過濾，取濾液蒸干，再用甲醇定容于容量瓶即得供試品溶液；

步驟2、參照峰溶液的制備：取一定量的橙皮苷、二苯乙烯苷、五味子醇甲、和大黃素，加入甲醇溶解；

步驟3、分別精密吸取供試品溶液和參照峰溶液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；

步驟4，將步驟3中獲得的精血補片指紋圖譜儀器導出，并導入中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統；選擇不同批次精血補片的色譜圖中均存在的色譜峰作為共有峰；用平均值計算法生成精血補片的對照指紋圖譜；計算各共有峰的相對保留時間、相對峰面積；

所述的步驟3中，液相色譜條件為：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相B，以體積百分比濃度為0.1％甲酸水溶液為流動相A進行梯度洗脫；流速為1.0mL/min；檢測波長為254nm；柱溫為30℃；梯度洗脫的流程為：0～10分鐘，5→10％流動相B，95→90％流動相A；10～50分鐘，10→25％流動相B，90→75％流動相A；50～65分鐘，25→45％流動相B，75→55％流動相A；65～80分鐘，45％流動相B，55％流動相A；80～115分鐘，45→80％流動相B，55→20％流動相A；

色譜柱規格為：4.6mm×250mm，5μm的YMC-Pack ODS-A色譜柱。

2.根據權利要求1所述的精血補片指紋圖譜的檢測方法，其特征在于，步驟1精血補片供試品溶液制備方法為：取精血補片供試品0.1～0.5g置具塞錐形瓶中，加入石油醚20mL，在250W，40kHz超聲下處理30分鐘；然后加甲醇20mL，超聲30分鐘，最后的溶液定容于2mL的容量瓶中。

3.根據權利要求1所述的精血補片指紋圖譜的檢測方法，其特征在于，步驟3中，分別精密吸取供試品溶液和參照峰溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄115分鐘的液相色譜圖。

4.根據權利要求1所述的精血補片指紋圖譜的檢測方法，其特征在于，指紋圖譜中的特征峰為與橙皮苷對應的8號峰，與二苯乙烯苷對應的6號峰，與五味子醇甲對應的10號峰，與大黃素對應的13號峰，其相對保留時間分別為47.296分鐘、38.890分鐘、75.158分鐘、90.264分鐘。

5.根據權利要求4所述的精血補片指紋圖譜的檢測方法，其特征在于，指紋圖譜中的特征峰還包括：相對保留時間為7.294分鐘的1號峰、相對保留時間9.388分鐘為的2號峰、相對保留時間為12.419的3號峰、相對保留時間為12.852的4號峰、相對保留時間為19.779的5號峰、相對保留時間為43.361分鐘的7號峰、相對保留時間為57.393分鐘的9號峰、相對保留時間為76.256分鐘的11號峰、相對保留時間為82.525分鐘的12號峰、相對保留時間為91.031分鐘的14號峰、相對保留時間為112.437分鐘的15號峰。