[發(fā)明專利]一種可視化基因芯片檢測(cè)肺部感染病原菌的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710517219.2
• 申請(qǐng)日: 2017-06-29
• 公開（公告）號(hào): CN107164526A
• 公開（公告）日: 2017-09-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫振學(xué);楊長春;陳金宏;楊貴榮;張旭;鄒德勇;段媛媛;高敏;趙海濱
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國人民武裝警察部隊(duì)總醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12Q1/04
• 代理公司: 北京紐樂康知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)11210
• 代理人: 田磊

1.一種可視化基因芯片檢測(cè)肺部感染病原菌的方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1基于臨床的肺部感染病原菌譜確定；

S2根據(jù)細(xì)菌的特定基因做檢測(cè)靶點(diǎn)；

S3設(shè)計(jì)通用引物和探針；

S4芯片制備；

S5靶基因擴(kuò)增；

S6芯片雜交、洗滌；

S7基因芯片可視化檢測(cè)；

S8優(yōu)化條件，建立方法；

S9臨床驗(yàn)證；

S10與細(xì)菌培養(yǎng)進(jìn)行比對(duì)；和

S11建立肺部感染病原菌可視化基因芯片檢測(cè)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可視化基因芯片檢測(cè)肺部感染病原菌的方法，其特征在于，步驟S2和S3中，以取篩查的10種細(xì)菌為檢測(cè)靶點(diǎn)，采用計(jì)算機(jī)Clustal×1.8 msw Alignment軟件對(duì)多種細(xì)菌的靶基因進(jìn)行序列比對(duì)，采用Primer 5.0軟件設(shè)計(jì)特異性引物與探針，并進(jìn)行Blast分析篩選，篩選通用性引物和多種呼吸道致病菌特異性檢測(cè)探針，所有下游引物在5′端進(jìn)行生物素標(biāo)記，全部寡核苷酸探針在3′端進(jìn)行氨基修飾。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可視化基因芯片檢測(cè)肺部感染病原菌的方法，其特征在于，步驟S4中，成引物、探針，將探針用點(diǎn)樣液稀釋至終濃度后，各取20ul置于384孔板，用點(diǎn)樣儀將探針點(diǎn)到空白的醛基化修飾玻片上，于室溫放置至少18h，每張芯片10個(gè)區(qū)，每個(gè)區(qū)為7×7 探針矩陣。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可視化基因芯片檢測(cè)肺部感染病原菌的方法，其特征在于，步驟S7中，依次點(diǎn)加鏈霉親和素標(biāo)記的辣根過氧化物酶、生物素－標(biāo)記的酪胺和鏈霉親和素－納米金孵育，最后加入銀增強(qiáng)試劑顯色，觀測(cè)結(jié)果。