[發(fā)明專利]一種用于雞滑液囊支原體高密度培養(yǎng)的培養(yǎng)基及其制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710516303.2
• 申請(qǐng)日: 2017-06-29
• 公開（公告）號(hào): CN108949605A
• 公開（公告）日: 2018-12-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 丁美娟;張小飛;尹秀鳳;許秀梅;汪愛芬;嚴(yán)鵬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京天邦生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12R1/35
• 代理公司: 常州佰業(yè)騰飛專利代理事務(wù)所(普通合伙) 32231
• 代理人: 高姍

1.一種用于雞滑液囊支原體高密度培養(yǎng)的培養(yǎng)基，包括批培養(yǎng)基和補(bǔ)料培養(yǎng)基，其特征在于，所述批培養(yǎng)基在補(bǔ)料發(fā)酵階段添加所述補(bǔ)料培養(yǎng)基；

所述批培養(yǎng)基包含下列組分：PPLO肉湯、水解乳蛋白、酵母浸出粉、煙酰胺、精氨酸、酚紅和豬血清；

所述批培養(yǎng)基用NaOH溶液調(diào)pH值；

所述補(bǔ)料培養(yǎng)基包含有下列組分：酵母浸出粉和葡萄糖。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于雞滑液囊支原體高密度培養(yǎng)的培養(yǎng)基，其特征在于，每升所述批培養(yǎng)基包含下列配比組分：

PPLO肉湯：20.0～25.5g；

水解乳蛋白：5～8g；

酵母浸出粉：3～7g；

煙酰胺：0.3g；

精氨酸：2g；

酚紅：0.008g；

豬血清：200ml；

所述批培養(yǎng)基用20％NaOH調(diào)pH值至7.6～7.8。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種用于雞滑液囊支原體高密度培養(yǎng)的培養(yǎng)基，其特征在于，每升所述補(bǔ)料培養(yǎng)基包含有下列配比組分：

酵母浸出粉：3～7g/L；

葡萄糖：5g/L。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于雞滑液囊支原體高密度培養(yǎng)的培養(yǎng)基，其特征在于，所述批培養(yǎng)基是在分批發(fā)酵模式下單獨(dú)用于雞滑液囊支原體發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于雞滑液囊支原體高密度培養(yǎng)的培養(yǎng)基，其特征在于，所述批培養(yǎng)基是在補(bǔ)料分批發(fā)酵模式下，與所述補(bǔ)料培養(yǎng)基聯(lián)用，用于雞滑液囊支原體發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

6.一種如權(quán)利要求1-5任意一項(xiàng)所述的用于雞滑液囊支原體高密度培養(yǎng)的培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，采用fed-batch補(bǔ)料培養(yǎng)發(fā)酵模式，先采用發(fā)酵罐配制批培養(yǎng)基，發(fā)酵罐原位滅菌，再配制補(bǔ)料培養(yǎng)基，滅菌；所述制備方法具體包括如下步驟：

步驟1：培養(yǎng)發(fā)酵罐接種用種子培養(yǎng)基

采用所述批培養(yǎng)基，用凍存菌種接種，培養(yǎng)后調(diào)PH值，獲得一級(jí)種子液，再將一級(jí)種子液接種傳代一次獲得二級(jí)種子液，將二級(jí)種子接種到發(fā)酵罐的發(fā)酵培養(yǎng)基中，進(jìn)行批培養(yǎng)；

步驟2：批培養(yǎng)基批培養(yǎng)階段

在批培養(yǎng)階段，通過補(bǔ)加NaOH溶液調(diào)pH值，使用壓縮空氣進(jìn)行通氣，通氣量達(dá)到3m²/h，設(shè)定攪拌速度，控制溶氧指數(shù)，當(dāng)溶氧指數(shù)下降至3％時(shí)，進(jìn)行補(bǔ)料培養(yǎng)；

步驟3：補(bǔ)料培養(yǎng)基補(bǔ)料階段

補(bǔ)料培養(yǎng)時(shí)，溶氧指數(shù)控制在20％，并與攪拌速度偶聯(lián)，補(bǔ)料速度從50g/h線性遞增到200g/h，在補(bǔ)料培養(yǎng)階段，通氣量保持不變，獲得用于雞滑液囊支原體高密度培養(yǎng)的培養(yǎng)基；

步驟4：菌液活菌量測(cè)定

菌液活菌量采用CCU方法測(cè)定。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種用于雞滑液囊支原體高密度培養(yǎng)的培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，每升所述批培養(yǎng)基包含下列配比組分：PPLO肉湯：20.0～25.5g；

水解乳蛋白：5～8g；

酵母浸出粉：3～7g；

煙酰胺：0.3g；

精氨酸：2g；

酚紅：0.008g；

豬血清：200ml；

所述批培養(yǎng)基用20％NaOH調(diào)pH值至7.6～7.8；

每升所述補(bǔ)料培養(yǎng)基包含有下列配比組分：

酵母浸出粉：3～7g/L；

葡萄糖：5g/L。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種用于雞滑液囊支原體高密度培養(yǎng)的培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，所述步驟1中，采用所述批培養(yǎng)基用凍存菌種按1:10比例接種，在37℃條件下培養(yǎng)48h，培養(yǎng)后調(diào)PH值至6.6，獲得一級(jí)種子液，再將一級(jí)種子液按1:10的比例再接種傳代一次獲得二級(jí)種子液，所述二級(jí)種子液生長(zhǎng)滴度為10⁹CCU/mL；按1:10的比例將二級(jí)種子液接種到發(fā)酵罐的發(fā)酵培養(yǎng)基中，進(jìn)行批培養(yǎng)。