[發明專利]一種基于生物3D打印水凝膠的三維肝癌組織構建的方法

在審

• 申請號: 201710514881.2
• 申請日: 2017-06-29
• 公開（公告）號: CN107400661A
• 公開（公告）日: 2017-11-28
• 發明（設計）人: 崔曉峰;高桂芳
• 申請（專利權）人: 武漢楓霖科技有限公司
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;B33Y10/00;B33Y70/00;C08F289/00;C08F220/08;G01N5/04
• 代理公司: 北京一格知識產權代理事務所(普通合伙)11316
• 代理人: 滑春生

1.一種基于生物3D打印水凝膠的三維肝癌組織構建的方法，其特征在于：包括以下步驟:

（1）合成GelMA支架材料，并且檢測酰基化率和光聚時間，然后配置光引發劑，保存備用；

（2）將GelMA與光引發劑均勻混合溶解后，將人肝癌細胞HepG2 與GelMA溶液混勻3D打印并光聚成細胞與水凝膠的復合體，然后加入10% FBS培養液中培養7天，即制備成含有HepG2來源的肝癌組織工程化單元，保存備用；

（3）檢測三維肝癌組織材料的溶脹比及平衡水含量；

（4）采用BE組化方法檢測2D及3D第7天時的生長狀態。

2.根據權利要求1所述的一種基于生物3D打印水凝膠的三維肝癌組織構建的方法，其特征在于：所述步驟（1）中的GelMA支架材料的合成具體方法為：稱取1克明膠溶于10毫升的去離子水中，50℃水浴保溫；劇烈攪拌并加入0.6毫升甲基丙烯酸酐，反應4小時；降溫至40℃并逐漸緩慢倒入1:4（v/v）的冰丙酮中沉淀，4℃ 4000轉/分鐘離心10分鐘，棄上清；將沉淀在40℃下，用去離子水透析72小時。

3.根據權利要求1所述的一種基于生物3D打印水凝膠的三維肝癌組織構建的方法，其特征在于：所述步驟（1）中的光引發劑采用PBS配制得到光引發劑I2959，保存備用，所述將GelMA支架材料進行水浴溶解，至最終濃度為10%。

4.根據權利要求1所述的一種基于生物3D打印水凝膠的三維肝癌組織構建的方法，其特征在于：所述步驟（2）具體方法為：將GelMA與光引發劑均勻混合溶解后得到GelMA溶液，然后將人肝癌細胞HepG2、GelMA溶液混勻，細胞濃度調整為1x10⁶/mL，制成生物打印墨水，生物打印的細胞與水凝膠體系置于紫外燈下光聚5分鐘固化，將固化的水凝膠放入培養箱中繼續培養7天，每2天更換新鮮培養液，觀察支架內細胞生長狀態。

5.根據權利要求1所述的一種基于生物3D打印水凝膠的三維肝癌組織構建的方法，其特征在于：所述步驟（3）具體方法為：分別將無細胞GelMA水凝膠，培養第0天生物3D打印水凝膠，培養第3天生物3D打印水凝膠，培養第7天生物3D打印水凝膠分別放入PBS內37^oC充分吸水3天，取出稱各組濕重W_濕重，并凍干48 h后稱各組干重W_干重，計算各組溶脹比及平衡水含量。