[發明專利]一種分離分析大體積環境水樣中微量孔雀綠的方法

有效

• 申請號: 201710512070.9
• 申請日: 2017-06-29
• 公開（公告）號: CN107328888B
• 公開（公告）日: 2019-04-12
• 發明（設計）人: 杜甫佑;鄭弦;阮貴華
• 申請（專利權）人: 桂林理工大學
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N33/06;G01N30/08
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本發明公開了一種分離分析大體積環境水樣中微量孔雀綠的方法。采用高內相乳液聚合技術合成具有親水性的聚苯乙烯STY?二乙烯苯DVB?甲基丙烯酸縮水甘油酯GMA高內相乳液聚合整體柱，即STY/DVB/GMA polyHIPE整體柱，其中STY、DVB、GMA和表面活性劑Span80的體積比為6:3:3:4，水相體積占水相和有機相總體積的比為90~92%；混合液在蠕動泵或高壓泵的作用下以2mL/min的流速通過STY/DVB/GMA polyHIPE整體柱，萃取并富集環境水樣品中存在的痕量還原型孔雀綠，采用體積比為1:4的PBS/乙腈混合溶液清洗STY/DVB/GMA polyHIPE整體柱，除去吸附力小的干擾物質，再用體積比為1:1的乙醇/三氯甲烷混合溶液洗脫富集在STY/DVB/GMA polyHIPE整體柱上的孔雀綠，收集洗脫液，用高效液相色譜?熒光光譜聯用分析測定，即實現對大體積環境水樣中微量孔雀綠的分離分析。

技術領域

本發明屬于環境樣品痕量目標物分離分析技術領域，特別涉及一種分離分析大體積環境水樣中微量孔雀綠的方法。該方法將高內相乳液聚合物整體柱與高效液相色譜聯用，適用于環境水樣及其他復雜基體中痕量孔雀綠目標物的萃取、富集、分離和檢測。

背景技術

孔雀綠(MG)，化學名稱為四甲基代二氨基三苯甲烷，化學式為C₂₃H₂₅ClN₂,別名堿性孔雀(石)綠、堿性綠、鹽基塊綠、苯胺綠等，為翠綠色有光澤的結晶，屬三苯甲烷類染料。MG常被用于制陶業、紡織業、皮革業、食品顏色劑和細胞化學染色劑，因其能有效預防水產品真菌感染和殺死寄生蟲，1933年起作為驅蟲劑、殺蟲劑、防腐劑在水產中使用，后曾被廣泛用于預防與治療各類水產動物的水霉病、鰓霉病和小瓜蟲病等。從上世紀90年代開始，國內外學者陸續發現孔雀綠能引起魚類的鰓和皮膚上皮細胞輕度炎癥；使腎管腔有輕度擴張，腎小管壁細胞的胞核也擴大；具有致突變、致畸、致癌等危害。MG進入環境以后，經過水的稀釋作用，多以痕量和超痕量存在，因此建立水體中MG的檢測方法是很有必要。

目前，MG的檢測方法主要有高效液相色譜法-紫外檢測法，高效液相色譜-安培法、高效液相色譜法-質譜聯用法、酶聯免疫法毛細管電泳法等。高效液相色譜法紫外檢測，MG的響應相對較低；利用MG能被硼氫化鉀還原為隱色孔雀石綠(LMG)，LMG具有熒光響應的特點，采用高效液相色譜法-熒光檢測法進行分析檢測，有助于提高MG殘留檢測的靈敏度。

固相萃取(Solid Phase Extraction，SPE)是一個由柱色譜分離過程、分離機理、固定相和溶劑的選擇等組成的試樣預處理技術，其利用固體吸附劑吸附液體樣品中的目標物，使目標物與樣品的基體和干擾化合物分離，然后再用洗脫液洗脫，最終達到分離和富集目標物的目的。SPE具有操作時間短、樣品量小、不需萃取溶劑、適于分析揮發性與非揮發性物質、重現性好等優點.對環境化學、食品、醫藥衛生、臨床化學、生物化學、法醫學等領域中復雜目標物樣品微量或痕量的分離、富集和分析做出了巨大的貢獻。

高內相乳液(High Internal Phase Emulsion(HIPE))，是一種水包油(O/W)或油包水(W/O)兩相體系，其中分散相的體積分率在74％以上，甚至達到99％。制備高內相乳液整體柱的過程中，可通過改變乳液材料的單體種類、單體種類、乳液材料的相比等精確控制孔的大小和分布，且高內相乳液整體柱具有高孔隙率、高比表面積、低密度、很好的物質輸送能力以及重現性好的特點，在分離介質、吸收材料、生物組織工程、催化劑載體等領域顯示出較好的應用前景。

發明內容

本發明的目的在于，克服現有技術中有機聚合物整體柱材料在種類和萃取效果上的很多不足，提供一種分離分析大體積環境水樣中微量孔雀綠的方法。

具體步驟為：

(1)采用高內相乳液聚合技術合成具有親水性的聚苯乙烯STY-二乙烯苯DVB-甲基丙烯酸縮水甘油酯GMA高內相乳液聚合整體柱，即STY/DVB/GMApolyHIPE整體柱。