[發(fā)明專利]一種用于檢測油菜莖基潰瘍病菌的引物探針組合及檢測方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710511735.4 | 申請日： | 2017-06-27 |
| 公開（公告）號： | CN107099613A | 公開（公告）日： | 2017-08-29 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 雷榮;吳品珊;邵思;陳乃中;朱水芳 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國檢驗檢疫科學(xué)研究院 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645 |
| 代理公司： | 北京紀凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司11245 | 代理人： | 關(guān)暢,何葉喧 |
| 地址： | 100176 北*** | 國省代碼： | 北京;11 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 用于 檢測 油菜 潰瘍 病菌 引物 探針 組合 方法 | ||
1.引物對，由引物F和引物R組成；
所述引物F為如下(a1)或(a2)：
(a1)序列表的序列1所示的單鏈DNA分子；
(a2)將序列1經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列1具有相同功能的DNA分子；
所述引物R為如下(a3)或(a4)：
(a3)序列表的序列2所示的單鏈DNA分子；
(a4)將序列2經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列2具有相同功能的DNA分子。
2.引物探針組合，由權(quán)利要求1所述的引物對和探針組成；
所述探針如下所示：
區(qū)段A-(dT-熒光基團)-四氫呋喃殘基-(dT-猝滅基團)-區(qū)段B；
在所述探針的3'端進行修飾；
所述區(qū)段A如序列表的序列3所示；
所述區(qū)段B如序列表的序列4所示。
3.如權(quán)利要求2所述的引物探針組合，其特征在于：所述熒光基團為FAM；所述淬滅基團為BHQ1。
4.如權(quán)利要求2或3所述的引物探針組合，其特征在于：所述“在所述探針的3'端進行修飾”為采用C3-spacer或磷酸鹽或生物素-TEG或胺進行修飾。
5.權(quán)利要求1所述的引物對或權(quán)利要求2-4任一所述的引物探針組合的應(yīng)用，為如下(b1)-(b4)中的至少一種：
(b1)鑒定或輔助鑒定待測菌株是否為油菜莖基潰瘍病菌；
(b2)檢測待測樣本中是否含有油菜莖基潰瘍病菌；
(b3)制備用于鑒定或輔助鑒定待測菌株是否為油菜莖基潰瘍病菌的試劑盒；
(b4)制備用于檢測待測樣本中是否含有油菜莖基潰瘍病菌的試劑盒。
6.含有權(quán)利要求1所述引物對的試劑盒甲，或，含有權(quán)利要求2-4任一所述引物探針組合的試劑盒乙；所述試劑盒的用途為如下(c1)或(c2)：
(c1)鑒定或輔助鑒定待測菌株是否為油菜莖基潰瘍病菌；
(c2)檢測待測樣本中是否含有油菜莖基潰瘍病菌。
7.權(quán)利要求6所述試劑盒甲或試劑盒乙的制備方法，包括將各條引物單獨包裝的步驟。
8.鑒定待測菌株是否為油菜莖基潰瘍病菌的方法，包括如下步驟：以待測菌株的總DNA為模板，采用權(quán)利要求2-4任一所述的引物探針組合進行重組酶介導(dǎo)等溫擴增，如果在6-20分鐘之間有熒光信號升起、待測菌株為或候選為油菜莖基潰瘍病菌，如果在6-20分鐘之間均沒有熒光信號升起、待測菌株為或候選為非油菜莖基潰瘍病菌。
9.檢測待測樣本中是否含有油菜莖基潰瘍病菌的方法，包括如下步驟：以待測樣本的總DNA為模板，采用權(quán)利要求2-4任一所述的引物探針組合進行重組酶介導(dǎo)等溫擴增，如果在6-20分鐘之間有熒光信號升起、待測樣本含有或疑似含有油菜莖基潰瘍病菌，如果在6-20分鐘之間均沒有熒光信號升起、待測樣本不含有或疑似不含有油菜莖基潰瘍病菌。
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