[發明專利]乳粉中沙門氏菌標準樣品及其制備方法

有效

• 申請號: 201710511245.4
• 申請日: 2017-06-28
• 公開（公告）號: CN107236783B
• 公開（公告）日: 2020-04-28
• 發明（設計）人: 趙紅陽;盧行安;陶德華;王鳴雨;劉漢霞;王偉;孫英健;韓青
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: C12Q1/10
• 分類號: C12Q1/10;C12N1/20;C12N1/04;C12R1/01;C12R1/445;C12R1/085
• 代理公司: 大連博晟專利代理事務所(特殊普通合伙) 21236
• 代理人: 楊迪

本發明屬于微生物學檢測方面的質量控制領域，特別涉及一種乳粉中沙門氏菌標準樣品及其制備方法。乳粉中沙門氏菌標準樣品包括目標菌和背景菌群，所述目標菌為沙門氏菌，所述背景菌群由蠟樣芽胞桿菌，金黃色葡萄球菌，陰溝腸桿菌，產氣腸桿菌組成。本發明均勻性、穩定性符合標準樣品要求，可以最大程度保證測試樣品的穩定性，從滿足特殊運輸的條件著手，通過特殊工藝的研究、穩定性和均勻性的研究等形成一套完善的標準樣品制備技術，適合于制備符合標準樣品要求的乳粉中沙門氏菌標準樣品，適用于實驗室的質量控制、方法驗證等用途。

技術領域

本發明屬于微生物學檢測方面的質量控制領域，特別涉及一種乳粉中沙門氏菌標準樣品及其制備方法。

背景技術

乳粉微生物學檢驗領域非常特殊。目前，國內外尚未有機構制備乳粉微生物學標準樣品和大規模生產的先例，仍屬空白領域。目前雖有一些機構制備微生物類的標準樣品，但標準樣品的均勻性和穩定性幾乎不能滿足要求，運輸極為困難；或標準樣品為僅含有目標菌的純菌株，與實際樣品差距較大，不能滿足日常實驗室質量控制等需要。

沙門氏菌是攝取獲得性食源性細菌性腸胃炎的首要病原菌，屬腸桿菌科，革蘭氏陰性腸道桿菌。如果制備的沙門氏菌樣品中，目標菌易發生變化(繁殖和死亡等)，就會導致樣品的保存期短，樣品的均勻性和穩定性差，影響質量控制效果。因此，綜合考慮細菌的生化特性，選取性質相對穩定的菌群作為目標菌對保證樣品的均勻性和穩定性十分重要。沙門氏菌樣品制備的工藝技術要求比較高，并且樣品的均勻性和穩定性與凍干的菌種、凍干的工藝條件、凍干保護劑的使用、再水化的介質等均有密切的關系。

乳粉中沙門氏菌指標，直接反映著乳粉的衛生質量與潛在致病風險。如果沙門氏菌數超過一定限量，就會導致食源性疾病發生。因此，制備均勻性與穩定性俱佳的沙門氏菌標準樣品，可以避免沙門氏菌檢驗的隨意性和不確定性，有效地保證檢測結果的準確可信。這對提高實驗室質量控制水平，保障乳粉安全，甚至于打破國際貿易壁壘、提高我國乳粉國際競爭力都具有特殊重要的意義。

發明內容

本發明的目的是克服沙門氏菌標準樣品中目標菌的活菌數在運輸、儲存和測試等過程中菌落數都可發生變化的問題，提供一種乳粉中沙門氏菌標準樣品，均勻性、穩定性符合標準樣品的要求，本發明的另一個目的是提供該樣品的制備方法，工藝簡單，成功率高。

本發明為實現上述目的所采用的技術方案是：乳粉中沙門氏菌標準樣品，其特征是：包括目標菌和背景菌群，所述目標菌為沙門氏菌(Salmonella)，所述背景菌群由蠟樣芽胞桿菌(Bacillus cereus)，金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)，陰溝腸桿菌(Enterobacter cloacae)，產氣腸桿菌(Enterobacter aerogenes)組成。

所述樣品以海藻糖、脫脂奶粉和無菌水為基質，其中海藻糖的體積分數為12％、脫脂奶粉的體積分數為15％。

所述樣品中目標菌的目標濃度為10²～10³CFU/mL，背景菌群的目標濃度為10³CFU/mL。

乳粉中沙門氏菌標準樣品的制備方法，其特征是：包括樣品添加菌株的選擇、凍干保護劑的配制、樣品凍干、樣品的均勻性和穩定性試驗四個步驟，其中樣品凍干過程為：菌株復蘇傳代—增菌—菌懸液配制—凍干和包裝—儲存，具體過程為：

(1)菌株復蘇傳代

將標準菌株接種到營養瓊脂斜面培養基中，在36±1℃下使其復蘇和生長，并對復蘇的菌株進行鑒定；

(2)增菌

目標菌培養至對數生長期末，背景菌群培養至穩定期，從斜面刮取菌落，加到10mL的凍干保護劑中制成相應單一菌種的菌液；

(3)菌懸液配制