[發明專利]乳粉中沙門氏菌標準樣品及其制備方法

有效

• 申請號: 201710511245.4
• 申請日: 2017-06-28
• 公開（公告）號: CN107236783B
• 公開（公告）日: 2020-04-28
• 發明（設計）人: 趙紅陽;盧行安;陶德華;王鳴雨;劉漢霞;王偉;孫英健;韓青
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: C12Q1/10
• 分類號: C12Q1/10;C12N1/20;C12N1/04;C12R1/01;C12R1/445;C12R1/085
• 代理公司: 大連博晟專利代理事務所(特殊普通合伙) 21236
• 代理人: 楊迪

1.乳粉中沙門氏菌標準樣品，其特征是：包括目標菌和背景菌群，所述目標菌為沙門氏菌，所述背景菌群由蠟樣芽胞桿菌，金黃色葡萄球菌，陰溝腸桿菌，產氣腸桿菌組成；所述樣品以海藻糖、脫脂奶粉和無菌水為基質，其中海藻糖的體積分數為10％、脫脂奶粉的體積分數為15%；所述樣品中目標菌群的目標濃度為10²～10³ CFU/mL，背景菌群的目標濃度為10³CFU/mL。

2.根據權利要求1所述的乳粉中沙門氏菌標準樣品的制備方法，其特征是：包括樣品添加菌株的選擇、凍干保護劑的配制、樣品凍干、樣品的均勻性和穩定性試驗四個步驟，其中樣品凍干過程為：菌株復蘇傳代—增菌—菌懸液配制—凍干和包裝—儲存，具體過程為：

（1）菌株復蘇傳代

將標準菌株接種到營養瓊脂斜面培養基中，在36±1℃下使其復蘇和生長，并對復蘇的菌株進行鑒定；

（2）增菌

目標菌培養至對數生長期末，背景菌群培養至穩定期，從斜面刮取菌落，加到10mL的凍干保護劑中制成相應單一菌種的菌液菌液；

（3）菌懸液配制

將上一過程得到的菌液與凍干保護劑混合，按目標菌的目標濃度10²～10³ CFU/mL和背景菌群的目標濃度10³ CFU/mL配制菌懸液，分別配制目標菌的菌懸液和4個背景菌的菌懸液，各背景菌的菌懸液，按1:1體積比混合目標菌和背景菌懸液，得到混合菌懸液，置于磁力攪拌器上不斷攪拌下分裝到樣品瓶中，加上瓶塞，但要留有空隙，不要蓋實；

（4）凍干和包裝

將裝有混合菌懸液的樣品瓶開蓋放入凍干機中，冷凍干燥50～55h，當樣品冷凍干燥結束后，直接進行箱內加塞，關閉機器，樣品瓶中樣品為真空狀態；

冷凍干燥機參數按如下設置：

冷凍速度0.5℃/min

早期冷凍點-1℃ 15min

冷凍溫度-40℃

共熔點-29℃

加熱溫度20℃ 120min

啟動冷凍干燥機，機器直接進入程序化的冷凍干燥過程，整個凍干過程50h；

（5）儲存

將樣品放置在-18℃條件下避光保存，從全部樣品中隨機挑選樣品發放給實驗室或進行均勻性和穩定性試驗。

3.根據權利要求2所述的乳粉中沙門氏菌標準樣品的制備方法，其特征是：所述凍干保護劑為含有海藻糖和脫脂奶粉的無菌水，其中體積分數分別為：海藻糖10%、脫脂奶粉15%。

4.根據權利要求2所述的乳粉中沙門氏菌標準樣品的制備方法，其特征是：所述樣品的均勻性和穩定性試驗按照GB/T 15000.3-2008《標準樣品工作導則（3） 標準樣品 定值的一般原則和統計方法》進行。