[發(fā)明專利]β受體阻滯劑個(gè)體化用藥基因檢測(cè)試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710509884.7
• 申請(qǐng)日: 2017-06-28
• 公開（公告）號(hào): CN109136360A
• 公開（公告）日: 2019-01-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬端;姜昕;徐沁;張靜;景丹丹;唐帥男
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 海門中科基因生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883
• 代理公司: 上海元一成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

1.β受體阻滯劑個(gè)體化用藥基因檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包括如下組分:

CYP2D6*10和ADRB1(1165G>C)位點(diǎn)擴(kuò)增和測(cè)序引物2對(duì)、PCR擴(kuò)增試劑、PCR產(chǎn)物純化試劑和DNA測(cè)序試劑；

所述引物序列如下：β受體阻滯劑引物序列5’-3’

位點(diǎn) 正向引物 反向引物

CYP2D6*10 GTAGTGAGGCAGGTATGGGG TGGTCGAAGCAGTATGGTGT

ADRB1(1165G>C) CGTCTTCTTCAACTGGCTGG CCCTACACCTTGGATTCCGA。

2.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述引物序列擴(kuò)增出的DNA序列如SEQ IDNO.1所示。

3.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述的PCR擴(kuò)增試劑選自dNTP、Taq DNA聚合酶。

4.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述的PCR產(chǎn)物純化試劑選自SAP酶、ExoI酶。

5.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述的DNA測(cè)序試劑選自BigDye mix、EDTA溶液、乙醇溶液、Hi-Di溶液。

6.一種β受體阻滯劑個(gè)體化用藥基因檢測(cè)的方法，其特征在于，采用上述的試劑盒進(jìn)行待測(cè)樣本的β受體阻滯劑個(gè)體化用藥基因分型檢測(cè)，其包括步驟：

(1)提取樣本的基因組DNA；

(2)CYP2D6*10和ADRB1(1165G>C)位點(diǎn)區(qū)域PCR擴(kuò)增；

(3)PCR產(chǎn)物純化；

(4)DNA測(cè)序反應(yīng)，進(jìn)行基因分型檢測(cè)。

7.按權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)CYP2D6*10和ADRB1(1165G>C)位點(diǎn)區(qū)域PCR擴(kuò)增中，采用所述引物序列；每個(gè)反應(yīng)體系為總體積50μL，包含Taq酶混合液25μL(dNTP、l0×PCR反應(yīng)緩沖液、MgCl₂)、去離子水17μL、引物對(duì)(5μM)3μL、基因組DNA(50ng/μL)2μL；PCR反應(yīng)條件為95℃3分鐘，進(jìn)行35個(gè)循環(huán)的95℃30秒，56℃20秒，72℃30秒最后進(jìn)行72℃5分鐘。

8.按權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述步驟(3)PCR產(chǎn)物純化中，每個(gè)反應(yīng)體系總體積為5.6μL，PCR產(chǎn)物4μL，再加入1.6μL SAP酶混合物(SAP酶、ExoI酶、去離子水)；反應(yīng)條件為37℃45分鐘，85℃15分鐘。

9.按權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述步驟(4)DNA測(cè)序反應(yīng)中，每個(gè)反應(yīng)的體系為總體積10μL，PCR酶解產(chǎn)物1μL、BigDye mix(Bigdye、5×seq)2.2μL和測(cè)序引物0.5μL，加水補(bǔ)足10μL；反應(yīng)條件為96℃1min，進(jìn)行33個(gè)循環(huán)的96℃10sec，56℃10sec，60℃2.5min；

反應(yīng)結(jié)束后每管內(nèi)加入2.5μL EDTA，30μL100％乙醇，蓋好，震蕩4次，避光靜置15分鐘，3860rpm，25℃離心40min，吸棄上層液體；加入100μL 70％預(yù)冷乙醇，蓋好，3860rpm，25℃離心15分鐘，吸棄上層液體；酒精在室溫?fù)]發(fā)干凈，加入8μL Hi-Di溶解DNA；在PCR儀上變性：95℃4分鐘，冰上靜置4分鐘；放入測(cè)序儀中進(jìn)行基因分型檢測(cè)。