[發明專利]遺傳性甲狀腺癌致病突變位點檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201710509883.2
• 申請日: 2017-06-28
• 公開（公告）號: CN109136368A
• 公開（公告）日: 2019-01-04
• 發明（設計）人: 馬端;姜昕;徐沁;唐帥男;景丹丹;張靜
• 申請（專利權）人: 海門中科基因生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

本發明屬生物技術領域，涉及遺傳性甲狀腺癌致病突變位點檢測試劑盒，具體涉及檢測遺傳性甲狀腺癌RET、PTEN基因是否發生致病位點突變的試劑盒。該試劑盒的主要成分包括：(1)RET、PTEN基因致病位點區域PCR擴增與測序引物14對；(2)PCR擴增試劑；(3)PCR產物純化試劑；(4)DNA測序試劑。采用本發明所述的試劑盒用于檢測遺傳性甲狀腺癌RET、PTEN基因致病位點突變情況，可以快速方便地查出該基因的攜帶者；預測中國人群該疾病的易感風險，從而指導早期篩查及預防。

技術領域

本發明屬生物技術領域，涉及遺傳性甲狀腺癌致病突變位點檢測試劑盒，具體涉及檢測遺傳性甲狀腺癌RET、PTEN基因是否發生致病位點突變的試劑盒。

背景技術

現有技術公開了甲狀腺癌是中國女性十大癌癥之一，為最常見的內分泌系統腫瘤，依據美國癌癥協會的統計為女性第5位常見的惡性腫瘤，為亞裔女性第4位常見的惡性腫瘤。

研究表明，甲狀腺癌呈現較高的家族聚集性，尤其在甲狀腺髓樣癌中，大約20％的病人為遺傳性。遺傳性甲狀腺髓樣癌主要表現為家族性甲狀腺髓樣癌、II型多發性內分泌腫瘤綜合征(MEN2)，MEN2分為MEN2A和MEN2B二種亞型，都表現為患者有極高的風險罹患甲狀腺髓樣癌。大量研究已確認RET基因突變是遺傳性甲狀腺髓樣癌發病的主要分子病因學基礎，約95％的遺傳性甲狀腺髓樣癌和80％以上的散發性甲狀腺髓樣癌是由RET基因突變引起的。Cowden綜合征(CS)，一種由PTEN基因胚系變異引起的一種常染色體顯性病變。CS的特征是多發的錯構瘤，可累及生殖細胞所有三個胚層的器官，并對乳腺癌、子宮癌和非髓性甲狀腺癌有高度患病風險，其患者一生有大約35％的可能性罹患甲狀腺癌(主要為甲狀腺濾泡性癌)。

自2005年起，基因檢測技術在腫瘤診斷領域的應用正在逐步扭轉美國腫瘤患者的生存局面。目前，美國已有超過500萬人做了基因檢測，使得一些重大慢性病治愈率大幅提高，如家族型腸癌的發病率降低了90％，死亡率降低了70％；英國超過200萬人做了基因檢測，目前基因檢測已成為該國人身保險必選項目。據統計，由于基因檢測技術的應用，美國結腸癌發病率下降了90％，乳腺癌的可治愈率達到96％以上，卵巢癌5年生存率提高了80％～90％，肝癌死亡率降低37％。美國、英國等發達國家都是基因檢測大國，基因檢測已經成為這些發達國家新興的主導產業。在基因科技開發與應用上，中國與發達國家處于同一起跑線。未來我國兩到三年內認識到基因檢測重要性的人群將達到總人口的15％～20％，約有3億人的市場潛在需求，每年基因檢測量至少在300萬人次以上，市場空間非常巨大。

基于現有技術的現狀，本申請的發明人擬提供一種遺傳性甲狀腺癌致病突變位點檢測試劑盒，具體涉及檢測遺傳性甲狀腺癌RET、PTEN基因是否發生致病位點突變的試劑盒。本產品可以通過遺傳性甲狀腺癌致病基因(RET、PTEN)致病位點突變情況檢測，建立中國人群在該疾病中的基因信息情況數據庫，使用關鍵技術為Sanger測序(準確性大于99.9％)，通過該項目檢測熱點突變可以預測中國人群該疾病的易感風險，從而指導早期篩查及預防。

發明內容

本發明的目的是提供一種遺傳性甲狀腺癌致病突變位點檢測試劑盒，具體涉及采用DNA測序技術檢測遺傳性甲狀腺癌RET、PTEN基因是否發生致病位點突變的試劑盒。

本檢測試劑盒主要包括以下成分：

(1)RET、PTEN基因致病位點區域PCR擴增與測序引物14對，引物序列如表1；

(2)常規PCR擴增試劑，如dNTP、Taq DNA聚合酶等；

(3)常規PCR產物純化試劑，如SAP酶、ExoI酶等；

(4)常規DNA測序試劑，如BigDye mix、EDTA溶液、乙醇溶液、Hi-Di溶液等。

表1 RET、PTEN基因致病位點區域的PCR擴增與測序引物序列