[發明專利]遺傳性甲狀腺癌致病突變位點檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201710509883.2
• 申請日: 2017-06-28
• 公開（公告）號: CN109136368A
• 公開（公告）日: 2019-01-04
• 發明（設計）人: 馬端;姜昕;徐沁;唐帥男;景丹丹;張靜
• 申請（專利權）人: 海門中科基因生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

1.遺傳性甲狀腺癌致病位點檢測試劑盒，其特征在于，包括以下組分：RET、PTEN基因致病位點區域PCR擴增與測序引物14對、PCR擴增試劑、PCR產物純化試劑和DNA測序試劑；所述引物序列如下所示：

2.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述引物序列擴增的DNA序列如SEQ IDNO.1所示。

3.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述的PCR擴增試劑選自dNTP或Taq DNA聚合酶。

4.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述的PCR產物純化試劑選自SAP酶或ExoI酶。

5.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述的DNA測序試劑選自BigDye mix、EDTA溶液、乙醇溶液和/或Hi-Di溶液。

6.一種檢測遺傳性甲狀腺癌致病位點的方法，其特征在于，采用權利要求1的試劑盒檢測待測樣本的遺傳性甲狀腺癌致病位點是否突變，其包括步驟：

(1)提取樣本的基因組DNA；

(2)RET、PTEN基因PCR擴增；

(3)PCR產物純化

(4)DNA測序反應，檢測遺傳性甲狀腺癌致病位點是否突變。

7.如權利要求6所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)的RET、PTEN基因PCR擴增，采用權利要求1所述引物序列；每個PCR擴增體系總體積為50μL，包含Taq酶混合液25μL、去離子水17μL、引物對3μL、基因組DNA 2μL；PCR反應條件為95℃3分鐘，進行35個循環的95℃30秒，56℃20秒，72℃30秒，最后進行72℃5分鐘。

8.如權利要求6所述的方法，其特征在于，所述步驟(3)中，PCR產物純化中每個反應體系總體積為5.6μL，包括PCR產物4μL和1.6μL SAP酶混合物，反應條件為37℃45分鐘，85℃15分鐘。

9.如權利要求6所述的方法，其特征在于，所述步驟(4)的DNA測序反應中，每個反應的體系為總體積10μL，包括PCR酶解產物1μL、BigDye mix 2.2μL和測序引物0.5μL，余量為去離子水；反應條件為96℃1min，進行33個循環的96℃10sec，56℃10sec，60℃2.5min；

反應結束后每管內加入2.5μL EDTA，30μL100％乙醇，蓋好，震蕩4次，避光靜置15分鐘，3860rpm，25℃離心40min，吸棄上層液體；加入100μL 70％預冷乙醇，蓋好，3860rpm，25℃離心15分鐘，吸棄上層液體；使酒精室溫揮發干凈，加入8μLHi-Di溶解DNA；在PCR儀上變性：95℃4分鐘，冰上靜置4分鐘，放入測序儀中測序，檢測遺傳性甲狀腺癌致病位點是否突變。