[發明專利]一種酶法高效制備角膜脫細胞基質組織工程支架的方法

有效

• 申請號: 201710507222.6
• 申請日: 2017-06-28
• 公開（公告）號: CN107213515B
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發明（設計）人: 張玉忠;李悅;陳秀蘭;石梅;趙芳;孫鶴敏;宋曉妍
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36;A61L27/50
• 代理公司: 濟南金迪知識產權代理有限公司 37219
• 代理人: 朱家富

一種酶法高效制備角膜脫細胞基質組織工程支架的方法，步驟如下：(1)將豬角膜基質板層置于稀釋的Myroilysin中，進行脫細胞處理，然后生理鹽水、蒸餾水分別沖洗，制得豬角膜脫細胞支架板層；(2)將豬角膜脫細胞支架放置在鉆臺上，滴加核黃素溶液，并在紫外燈下照射，然后生理鹽水、蒸餾水分別沖洗，制成核黃素交聯的豬角膜脫細胞支架；(3)將步驟(2)制得的交聯的豬角膜脫細胞支架經脫水、滅菌，4℃保存待用。本發明制得的脫細胞支架仍保留足夠的機械強度，并且形成了一定的孔隙，脫水后透明度較高，有利于細胞的生長和遷移。

技術領域

本發明涉及一種酶法高效制備角膜脫細胞基質組織工程支架的方法，屬于生物技術領域。

背景技術

角膜疾病的致盲率在眼科疾病中占據第二位，我國每年也有數百萬角膜盲患者。角膜病的早期治療方法主要根據病因來對癥治療，晚期時，由于角膜多出現瘢痕、潰瘍等，需要手術替換病變角膜，即角膜移植術。角膜移植術是治療角膜盲最重要的方法。我國每年有數百萬角膜盲患者，其中大部分患者更可以通過角膜移植術脫盲。角膜移植術的供體角膜絕大多數為人源角膜，因此數量極其有限，最終每年可以通過異體角膜移植術重見光明患者的只有數千例。這種情況下，替代材料的發展成為了角膜盲患者康復的希望，因而研究能夠替代角膜的組織工程材料成為一種迫切的需求。

角膜基質層是構成角膜的主要部分，占角膜厚度的90％，主要成分為角膜基質細胞、膠原、糖蛋白和蛋白多糖。正常的角膜基質由200-250層膠原纖維板構成，交錯排列，其中構成角膜纖維板層的膠原纖維相互平行排列，直徑一致，集中分布于30nm附近，間距相等。角膜基質特征性組織學結構與角膜透明性狀密切相關，是其他組織所不能替代的。因此，角膜基質組織的構建是組織工程技術構建角膜的主要任務、難點和關鍵所在。組織工程角膜載體材料需要有良好的三維立體結構和功能蛋白以支持種子細胞的生長，一定的機械強度，較好的透光度、屈光度、透氧性，以及良好的生物可降解性等等。角膜組織工程材料主要包括天然材料，人工材料及復合材料。天然材料包括羊膜，殼聚糖，膠原，異種角膜基質等。人工材料是人工合成的高分子物質，包括聚羥基乙酸，合成膠原等，但由于非酶性水解，未知的體內代謝過程及產物，作為角膜組織工程的支架材料，仍需進行深入的研究。另外，人工材料通常在曲率，透明度，機械強度，密度，孔隙率等性質上與天然角膜有一定差異。引用兩種或兩種以上的材料，通過不同的配比、合成方法等調節材料的性質，制成是復合材料。但在復合材料中，各部分的比例，混合方法，材料的具體物理、化學及生物學性質等，還需要進一步研究。因此，由于角膜組織結構的復雜性，人工和復合材料材料很難滿足角膜移植后組織層次的正常重建。