[發明專利]一種檢測氟喹諾酮類藥物的方法

有效

• 申請號: 201710504616.6
• 申請日: 2017-06-28
• 公開（公告）號: CN107688010B
• 公開（公告）日: 2019-12-03
• 發明（設計）人: 楊亞玲;王蒙;華建豪
• 申請（專利權）人: 昆明理工大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N30/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了基于磁性納米材料?碳量子點熒光增敏檢測氟喹諾酮類藥物的方法，采用磁性納米材料作為凈化材料，通過磁固相微萃取對牛奶基體進行凈化處理；采用以聚(4?苯乙烯磺酸?共聚?馬來酸)鈉鹽為碳源及硫源，水熱法合成對氟喹諾酮類藥物具有熒光增敏作用的硫摻雜熒光碳量子點，其增強的熒光信號強度與氟喹諾酮類藥物的濃度呈一定線性關系，據此建立了檢測氟喹諾酮類藥物的高效液相色譜法；制備的磁性納米材料具有優異的分散性和較好的凈化作用，消除了復雜基體的干擾，而且硫摻雜熒光碳量子點對氟喹諾酮類藥物有著不同程度的熒光增敏作用，利用高效液相色譜同時測定多種氟喹諾酮類藥物；本發明方法具有靈敏度高、重現性好等顯著的特點。

技術領域

本發明涉及化學分析檢測技術領域，具體為一種基于磁性納米材料凈化-碳量子點熒光增敏結合高效液相色譜檢測牛奶中氟喹諾酮類藥物的方法。

背景技術

氟喹諾酮類藥物(QNS)是一類人工合成的廣譜殺菌性抗菌藥物，因其具有抗菌譜廣、抗菌作用強、生物利用度高、毒副作用小、與其它抗菌藥物無交叉耐藥性等特點，而在臨床上被廣泛應用。由于該類藥物在動物體內消除緩慢，若過量使用或使用不當會造成動物源性產品中的藥物殘留；人體攝入后容易導致細菌耐藥性問題，對中樞神經系統及關節部位造成不良反應。因此氟喹諾酮類藥物的殘留問題引起了廣泛關注及重視。我國以及日本、歐盟等國家都將氟喹諾酮類藥物列入限制使用的獸藥名單，制訂出相應的最高殘留限量，牛奶中氟喹諾酮類藥物的最高殘留限量在20-100 μg/kg之間。

目前氟喹諾酮類藥物殘留的檢測方法主要有微生物分析法、分光光度法、熒光光度法和液相色譜紫外/熒光/質譜檢測法等方法。上述檢測方法中存在操作繁瑣、耗時、耗費大量揮發性有機溶劑、靈敏度低、重現性差等缺點。碳量子點作為一類粒徑一般小于10 nm的新型碳材料，因其優異的光學性能，可調的激發和發射行為，較高的熒光穩定性，較低的毒性和良好的生物相容性，被廣泛應用于各領域。碳量子點用于氟喹諾酮類藥物的熒光增敏，本研究小組之前做過相關報道，但由于利用分子熒光檢測，對于多種氟喹諾酮類藥物的檢測干擾嚴重，無法完成。同時，碳量子點熒光增敏結合高效液相色譜檢測未見任何報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種檢測靈敏、簡單、復雜基體樣品萃取凈化效果好的基于磁性納米材料凈化-碳量子點熒光增敏結合高效液相色譜檢測氟喹諾酮類藥物的方法。

本發明利用聚(4-苯乙烯磺酸-共聚-馬來酸)鈉鹽制備水溶性硫摻雜熒光碳量子點，其熒光量子產率可高達40%以上，且對氟喹諾酮類藥物有著不同程度的熒光增敏作用。用于牛奶中氟喹諾酮類藥物殘留的分析測定時，將Fe₃O₄磁性納米粒子作為凈化材料用于磁固相微萃取，對消除牛奶基體干擾有著顯著凈化效果；同時結合水溶性硫摻雜熒光碳量子點對氟喹諾酮類藥物不同程度的熒光增敏作用，實現了對復雜基體牛奶中多種氟喹諾酮類藥物殘留高靈敏度的同時測定；相比于傳統方法，具有低成本、靈敏度高、凈化效果好的優勢。

本發明基于磁性納米材料凈化-碳量子點熒光增敏結合高效液相色譜檢測牛奶中氟喹諾酮類藥物的方法包括如下步驟：

(1) 標準工作曲線的繪制：采用檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液配置8個濃度在0.01～20μg/L范圍內的氟喹諾酮類藥物標準溶液，加入水溶性硫摻雜熒光碳量子點溶液，用檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液定容至5mL，渦旋混勻靜置后，在高效液相色譜條件下進樣分析檢測，以色譜峰面積對其相應濃度作圖進行回歸分析，即得到標準工作曲線，由此得到氟喹諾酮類藥物的線性回歸方程；

(2) 樣品制備：取30-35mL牛奶于具塞離心管中水浴加熱至40-45℃，攪拌下緩慢加入0.5-1.0mol/L HCl，調節pH至4.7-5.0，待上述混懸液冷卻至室溫后，于 5000r/min轉速下離心10 min，取上清液，避光保存于4 ℃冰箱待分析測定；