[發明專利]一種高抗性產海藻糖釀酒酵母菌株的篩選及應用

有效

• 申請號: 201710503931.7
• 申請日: 2017-06-19
• 公開（公告）號: CN107245458B
• 公開（公告）日: 2019-12-24
• 發明（設計）人: 彭宇;孫美玲;黃朝湯
• 申請（專利權）人: 湖北大學
• 主分類號: C12N1/18
• 分類號: C12N1/18;C12P19/12;C12R1/865
• 代理公司: 42212 武漢河山金堂專利事務所(普通合伙)
• 代理人: 丁齊旭

本發明提出了一種高抗性產海藻糖釀酒酵母菌株的篩選及應用，菌種保藏號為CCTCC NO:M 2012473。其篩選步驟為：收集自行發酵的野生皺皮柑Citrus verrucosa Hort.汁液，吸取0.2mL均勻涂布于裝有已滅菌豆芽汁瓊脂培養基的培養皿上，28℃恒溫箱培養2d后進行鏡檢。從中挑取生長菌落良好，有明顯酵母菌菌落特征，呈淡淡的果香味的菌株。在無菌操作臺上，挑取選定的酵母菌劃線接種于新鮮斜面培養基上，培養3d。再依此分區劃線培養，直至分離出純單菌株。本發明的海藻糖釀酒酵母菌株可以用來發酵生產海藻糖，在食品、食品保鮮、醫藥等領域有廣泛的應用應用，具有良好的開發利用潛力。

技術領域：

本發明涉及一種高抗性產海藻糖釀酒酵母菌株篩選及應用，屬于生物工程領域。

技術背景：

海藻糖是一種非還原性二糖，廣泛存在于海藻、酵母、霉菌和食用菌等生物體內，是一種貯藏性碳水化合物。具有保護細胞核等生物活動性物質在脫水、干燥、高溫、冷凍及高滲透壓等不良環境條件下活性免遭破壞的功能，是國際上最近開發的主要低聚糖之一。

海藻糖在微生物細胞中的合成非常強烈。它的積累一般和生長速度的降低有關，特別是在分化過程和營養不足時。它的合成主要由二種酶催化，其反應分兩步進行：第一步，尿苷二磷酸葡萄糖或鳥苷二磷酸葡萄糖經6-磷酸海藻糖合成酶的催化轉移給6-磷酸葡萄糖，形成6-磷酸海藻糖；第二步，6-磷酸海藻糖經6-磷酸海藻糖磷酸酯酶催化水解，形成海藻糖。

若將酵母細胞置于饑餓條件下產海藻糖的量會大大提高，當海藻糖含量越高時，酵母細胞對干燥的抵抗力也明顯增強。在生命周期期間，海藻糖在再生階段積累，在出芽期間流動。對于僅在含糖培養基中的芽孢出芽，海藻糖的重要性是不明顯的，因為海藻糖分解產生的葡萄糖量與從培養基中吸收的葡萄糖相比是很少的。真菌芽孢中內部海藻糖的儲存，對于處在不良環境條件下芽孢的出芽更為重要。生物體能在無水狀態下忍受許多年，當它們重新吸收水分后，很快復活并恢復代謝活力。

生長速度降低伴隨著海藻糖的積累，而生長的促進，特別在休眠階段，生長的誘導導致海藻糖的流動。在真菌芽孢出芽時，出芽的條件和海藻糖分解的程度密切相關。糖源與氮源的加入是出芽所必須的，但是單獨糖源的加入引起部分海藻糖流動的同時也伴隨海藻糖的再合成，而糖源與氮源同時加入則引起非常強烈的海藻糖分解而沒有海藻糖的合成。海藻糖在休眠條件下也許是作為能量的補充物和中間物，ATP被認為是休眠期間海藻糖流動的控制因子。

本發明以野生柑橘-皺皮柑Citrus verrucosa Hort.為原料，以高抗性下菌株的生長狀態和代謝產物的形成模式作為指標，篩選出了一株高抗性產海藻糖的釀酒酵母菌株。

發明內容：

本發明的目的是提出一種一株高抗性產海藻糖的釀酒酵母菌株，利用其特性發酵制備海藻糖。

本發明是這樣實現的。從江漢平原廣泛分布的一種野生資源-皺皮柑的汁液中，采用微生物分離純化的方法，篩選出一株高抗性產海藻糖的釀酒酵母菌株。該酵母菌具有良好的應用前景。

具體篩選步驟為：

1、將野生皺皮柑剝皮，榨汁，裝入瓶中，在夏季高溫下，皺皮柑汁液可進行自行發酵，酒體散發淡淡的果香味，但品質不穩定，酒液呈酸味。證實野生皺皮柑中存在釀造果酒及耐高溫的酵母菌。