[發明專利]一種基于格氏嗜鹽堿桿菌Argonaute靶向激活基因轉錄的方法有效
| 申請號： | 201710502930.0 | 申請日： | 2017-06-27 |
| 公開（公告）號： | CN107266583B | 公開（公告）日： | 2021-02-09 |
| 發明（設計）人： | 徐建勇 | 申請（專利權）人： | 深圳大學 |
| 主分類號： | C07K19/00 | 分類號： | C07K19/00;C12N15/63;C12N15/113;C12N9/22 |
| 代理公司： | 深圳市君勝知識產權代理事務所(普通合伙) 44268 | 代理人： | 劉文求 |
| 地址： | 518060 廣東*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基于 格氏嗜 鹽堿 桿菌 argonaute 靶向 激活 基因 轉錄 方法 | ||
1.一種NgAGO-VP64融合蛋白，其特征在于，是將VP64融合到NgAGO的C末端或N末端，并進行人源化密碼子優化所得，所述融合蛋白的序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。
2.一種表達如權利要求1所述NgAGO-VP64融合蛋白的質粒，其特征在于，是將NgAGO-VP64融合蛋白基因克隆到表達載體獲得。
3.一種如權利要求1所述NgAGO-VP64融合蛋白或如權利要求2所述質粒在基因編輯方面的應用。
4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述質粒在基因編輯方面的應用為在制備NgAGO基因編輯工具方面的應用。
5.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述基因編輯是指激活內源基因的表達。
6.一種基于格氏嗜鹽堿桿菌Argonaute靶向激活內源基因轉錄的NgAGO基因編輯工具，其特征在于，包括權利要求1所述NgAGO-VP64融合蛋白或權利要求2所述質粒，還包括導向DNA，所述導向DNA為SEQ ID NO.3～12所示序列片段中的任一種或幾種的混合物。
7.一種基于格氏嗜鹽堿桿菌Argonaute靶向激活內源基因轉錄的方法，其特征在于，是利用權利要求6所述NgAGO基因編輯工具與轉染試劑共轉染細胞。
8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，包括如下步驟：
S1.細胞傳代培養至指數增長期，轉染前0.5～2小時，將細胞培養基換為無血清培養基，孵育0.5～2小時；
S2.將NgAGO-VP64融合蛋白質粒和導向DNA稀釋到無血清培養基中，轉染試劑稀釋到無血清培養基中，然后將兩者混合，室溫靜置20～30分鐘后，加入細胞中，2～4小時后加入血清至終濃度為8～15％；
S3.第二天重復轉染，但只需轉染導向DNA。
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