[發(fā)明專利]一種早期精確診斷帕金森病的方法和試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710494171.8
• 申請日: 2017-06-26
• 公開（公告）號: CN107419008B
• 公開（公告）日: 2021-07-13
• 發(fā)明（設計）人: 江海松;李賓;富磊;江城松
• 申請（專利權(quán)）人: 上海惠皓醫(yī)療科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

本發(fā)明涉及一種早期精確診斷帕金森病的方法和試劑盒。更具體地，本發(fā)明提供了一種通過定量PCR的方法在外周血檢測鋅指轉(zhuǎn)錄因子蛋白PARIS(ZNF746)mRNA的水平來早期檢測帕金森病的方法。本發(fā)明還提供了實施所述的方法的檢測試劑盒。本發(fā)明的方法及試劑盒成本低、程序簡單、耗時少。

技術領域

本發(fā)明屬于疾病診斷領域，更具體地，本發(fā)明涉及一種早期精確檢測帕金森病的方法和試劑盒。

背景技術

中國是世界上人口第一大國，伴隨著改革開放以來生活水平的提高和壽命的延長。目前中國已經(jīng)進入人口老齡化快速發(fā)展階段。2020年中國60周歲以上老年人口將達到2.43億。如何讓老年人群更健康地生活將是未來幾十年一個重大的機遇和挑戰(zhàn)。伴隨老齡化發(fā)生的神經(jīng)功能退化性疾病逐漸成為困擾老年人及其家庭的重要病癥。

帕金森疾病(parkinson disease，PD)是一種常見的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，其特征性的病理改變是中腦黑質(zhì)多巴胺(dopamine，DA)能神經(jīng)元的進行性缺失，進而導致投射至紋狀體多巴胺神經(jīng)遞質(zhì)的減少。臨床上帕金森癥病人主要表現(xiàn)為麻痹、震顫、運動障礙等。遺傳因素、環(huán)境因素、年齡老化、氧化應激以及炎癥等均參與帕金森氏病多巴胺能神經(jīng)元的變性死亡過程。5-10％帕金森癥病人有家族史。其中，氧化應激在各種神經(jīng)變性機制中處于主導地位，對多巴胺神經(jīng)元死亡起重要作用。

多年的研究表明，在患者出現(xiàn)典型的帕金森疾病的癥狀時，多巴胺細胞已出現(xiàn)大量的死亡，在這時再進行干預和治療已無法挽回腦功能的進一步退化。無法做到早期診斷并進行早期干預是造成國際上各大藥廠在帕金森病的臨床試驗中屢受挫折的一個主要原因。目前，本領域尚無可以穩(wěn)定、有效地在帕金森疾病早期進行診斷的試劑。

因此，早期診斷帕金森疾病的方法以及試劑的開發(fā)是本領域的當務之急。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種早期精確檢測帕金森病的方法和試劑盒。

在本發(fā)明的第一方面，提供一種用于早期診斷帕金森疾病的試劑盒，所述的試劑盒中包括：特異性擴增鋅指轉(zhuǎn)錄因子PARIS上的靶序列片段1的引物對；所述的靶序列片段1為：以SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示序列的引物擴增鋅指轉(zhuǎn)錄因子PARIS所獲得的序列片段，或包含鋅指轉(zhuǎn)錄因子PARIS上的該序列片段及其上游和/或下游1～20個，如20個，15個，10個，5個堿基的序列片段；

在一個優(yōu)選例中，所述的用于早期診斷帕金森疾病的試劑盒中還包括：特異性針對所述的靶序列片段1的探針；較佳地，所述的探針是熒光探針。

在另一優(yōu)選例中，所述的用于早期診斷帕金森疾病的試劑盒，所述的引物對選自：SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示序列的引物對。

在另一優(yōu)選例中，所述的用于早期診斷帕金森疾病的試劑盒，中還含有：鋅指轉(zhuǎn)錄因子PARIS標準品，其為SEQ ID NO:7所示序列，或為鋅指轉(zhuǎn)錄因子PARIS的基因序列上包含該SEQ ID NO:7所示序列及其上下游序列的長度為200bp以內(nèi)的序列片段。

在另一優(yōu)選例中，所述的標準品是質(zhì)粒。

在另一優(yōu)選例中，所述的用于早期診斷帕金森疾病的試劑盒中還含有：陰性對照和陽性對照；較佳地，所述的陰性對照為無PARIS mRNA的RNA樣品；所述的陽性對照為含有PARIS mRNA的RNA樣品。

在另一優(yōu)選例中，所述的用于早期診斷帕金森疾病的試劑盒中還含有：

逆轉(zhuǎn)錄酶，較佳地為莫洛尼氏鼠白血病病毒M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶；

逆轉(zhuǎn)錄RT反應液；

RNA酶抑制劑；

聚合酶鏈PCR反應液；

DNA聚合酶，較佳地為耐熱DNA聚合酶Taq；和/或