[發明專利]制備甲基潑尼松龍的方法

在審

• 申請號: 201710493975.6
• 申請日: 2017-06-26
• 公開（公告）號: CN107338281A
• 公開（公告）日: 2017-11-10
• 發明（設計）人: 戴靜;劉建
• 申請（專利權）人: 浙江仙琚制藥股份有限公司
• 主分類號: C12P33/02
• 分類號: C12P33/02;C12R1/06
• 代理公司: 臺州市南方商標專利事務所(普通合伙)33225
• 代理人: 白家駒

1.制備甲基潑尼松龍的方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）縮酮保護反應：將氫化可的松1溶解于二氯甲烷，攪拌下加入甲醛水溶液, 緩慢滴加濃鹽酸,于一定溫度下攪拌反應一定時間，TLC檢測沒有原料點，停止反應，分離有機相，水相用二氯甲烷萃取，合并有機相；有機相依次用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌、用飽和氯化鈉水溶液洗滌、用無水硫酸鎂干燥，減壓旋蒸除去有機溶劑，得到上保護產物2a和2b的混合物，反應式為

（2）亞甲基化反應：在反應瓶中加入醋酸鈉、二氯甲烷和甲縮醛，攪拌下緩慢滴加POCl₃，氮氣保護下加熱至一定溫度，在此溫度下反應1小時；上保護產物2a和2b混合物溶于二氯甲烷，將此上保護產物的二氯甲烷溶液緩慢滴加至反應液，再緩慢滴加POCl₃，反應一定時間，TLC檢測沒有原料點，降溫至室溫，加入氨水調pH值至堿性，分離有機相，水相用二氯甲烷萃取，合并有機相；有機相依次用水洗、用飽和氯化鈉水溶液洗滌、用無水硫酸鈉干燥，減壓旋蒸除去有機溶劑，得到六位上亞甲基產物3a和3b的混合物，反應式為

（3）氫化反應：將六位上亞甲基產物3 a和3b的混合物溶于乙醇和醋酸的混合液, 加入環己烯、鈀碳，加熱至回流，于一定溫度反應一定時間，停止反應，趁熱過濾回收鈀碳，熱乙醇洗滌不溶物，合并有機溶劑，減壓除去大部分有機溶劑，加入氫氧化鈉水溶液調pH值至中性，二氯甲烷萃取，減壓除去有機溶劑，得氫化產物4，反應式為

（4）水解反應：將氫化產物4加入乙醇，降溫至0℃，加入濃鹽酸在一定溫度反應一定時間，TLC檢測沒有原料點，停止反應， 倒入冰水中水析，抽濾，50℃干燥，乙醇精制，烘干得到6α-甲基氫化可的松產物5，反應式為

（5）脫氫反應：用6α-甲基氫化可的松產物5為底物進行氧化脫氫，生產甲基潑尼松龍，包括如下步驟：

S51：種子培養：在帶夾套的發酵罐中加入以6α-甲基氫化可的松產物5為底物的發酵培養基，裝料，滅菌，冷卻到一定溫度，接入一定量的簡單節桿菌進行發酵；發酵分兩個階段：第一階段為菌體生長階段：接種，調節一定溫度和空氣流量，培養一定時間，菌濃OD₆₂₀達到一定值時，進行投料；第二階段為微生物轉化階段：投料，調節一定溫度和空氣流量，轉化一定時間，發酵完成；

S52：提取精制：對發酵液進行過濾得到發酵濾餅，對發酵濾餅采用丙酮-水混合溶劑進行提取精制，對提取液進行減壓濃縮，得到甲基潑尼松龍6，反應式為

。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（1）中所述氫化可的松1、甲醛水溶液和濃鹽酸的比例為1W:5W: 5W～1W:20W: 20W，氫化可的松1的濃度為0.04～0.15mol/L。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（1）中所述反應溫度為20℃~30℃，反應時間為6~10小時。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）中所述上保護產物2、醋酸鈉、二氯甲烷、甲縮醛和POCl₃的比例為1W:1W:10W:13W:5W～1W:4W:20 W:26W:10W。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）中所述反應溫度為40℃~60℃，反應時間為4~8小時。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（3）中所述六位上亞甲基產物3、乙醇、醋酸、環己烯、鈀碳的比例為1W:4W:5W:1W:0.1W～1W:15W:20 W:4W:0.5 W。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（3）中所述反應溫度為60℃~90℃，反應時間為3~10小時。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（4）中所述氫化產物4、乙醇、濃鹽酸的比例為1W:0.5W:2W～1W:4W:10W。

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（4）中所述反應溫度為-5℃~10℃，反應時間為0.5~2小時。

10.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（5）中所述發酵培養基成分包括：葡萄糖6～8g/L，酵母膏6～8 g/L，玉米漿10～12 g/L，磷酸二氫鉀1 g/L，發酵培養基的pH=7.2～7.5；菌體生長階段，菌體接種量為8～10%，培養溫度為30～32℃，培養時間為8～10h，菌濃OD₆₂₀=30-40%時進行投料；微生物轉化階段的投料濃度為0.5～10g/L，轉化溫度為33～34℃，轉化時間為24～40h。