[發(fā)明專(zhuān)利]一種測(cè)定生鮮乳樣品中的多種霉菌毒素含量的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710493524.2
• 申請(qǐng)日: 2017-06-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107153103B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-04-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 仲伶俐;毛建霏;付成平;雷紹榮;郭靈安;歐陽(yáng)華學(xué);雷欣宇;李曦;羅玲;黃世群;周虹;趙珊
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院分析測(cè)試中心
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/02
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京輕創(chuàng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11212
• 代理人: 張帆

本發(fā)明涉及一種測(cè)定生鮮乳樣品中的多種霉菌毒素含量的方法，其包括以下步驟：S1：從所述生鮮乳樣品中提取霉菌毒素提取物；S2：對(duì)所述霉菌毒素提取物進(jìn)行液相色譜分離，得到洗脫級(jí)分；S3：使用三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀對(duì)所述洗脫級(jí)分進(jìn)行質(zhì)譜鑒定，確定霉菌毒素的種類(lèi)和含量。本發(fā)明可充分提取14種霉菌毒素，并采用三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀，其比單四級(jí)桿質(zhì)譜儀精度更高，可更好地分離目標(biāo)化合物和干擾雜質(zhì)；從而提供可靠、準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及食品檢驗(yàn)檢疫領(lǐng)域，更特別地，涉及一種測(cè)定生鮮乳樣品中的多種霉菌毒素含量的方法。

背景技術(shù)

牛奶已成為人們生活的必需品，尤其嬰幼兒牛奶是母乳的最佳替代品，但霉菌毒素已成為牛奶的主要質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)因子之一，嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康。霉菌毒素在牛奶加工過(guò)程中，無(wú)論是巴氏殺菌還是高溫殺菌均無(wú)法降解霉菌毒素，霉菌毒素可以完整殘留至奶產(chǎn)品中，因此，牛奶中霉菌毒素越來(lái)越受到人們的廣泛關(guān)注。

目前，監(jiān)測(cè)牛奶中霉菌毒素污染狀況的方法主要為酶聯(lián)免疫吸附法，該方法廣泛應(yīng)用于霉菌毒素分析檢測(cè)，但由于假陽(yáng)性和不能精確定量等缺點(diǎn)限制了其進(jìn)一步應(yīng)用。因此，基于薄層色譜法、氣相色譜、高壓液相色譜等技術(shù)的定量檢測(cè)方法已經(jīng)建立，但這些方法只能檢測(cè)一種或一類(lèi)霉菌毒素，已不能滿(mǎn)足現(xiàn)代奶業(yè)中霉菌毒素的監(jiān)測(cè)和科研需求。

因此，需要一種新的測(cè)定生鮮乳中的多種霉菌毒素的方法。

發(fā)明內(nèi)容

為解決以上問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種測(cè)定生鮮乳樣品中的多種霉菌毒素含量的方法，其包括以下步驟：

S1：從所述生鮮乳樣品中提取霉菌毒素提取物；

S2：對(duì)所述霉菌毒素提取物進(jìn)行液相色譜分離，得到洗脫級(jí)分；

S3：使用三重四極桿質(zhì)譜儀對(duì)所述洗脫級(jí)分進(jìn)行質(zhì)譜鑒定，確定霉菌毒素的種類(lèi)和含量。

本發(fā)明采用三重四極桿質(zhì)譜儀，其比單四級(jí)桿質(zhì)譜儀精度更高，可更好地分離目標(biāo)化合物和干擾雜質(zhì)；從而提供可靠、準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)。本方法通過(guò)三重四極桿質(zhì)譜儀的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描方式采集各霉菌毒素的特征母離子及其子離子信息,結(jié)合保留時(shí)間和離子豐度比進(jìn)行定性和定量分析。

優(yōu)選地，所述多種霉菌毒素為以下霉菌毒素中的多種：黃曲霉毒素M2、黃曲霉毒素M1、黃曲霉毒素G2、黃曲霉毒素G1、黃曲霉毒素B2、黃曲霉毒素B1、β-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉烯醇、α-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素B和赭曲霉毒素A。

優(yōu)選地，S1中使用體積分?jǐn)?shù)為5-10％的乙腈水溶液從所述生鮮乳樣品中提取所述霉菌毒素提取物。體積分?jǐn)?shù)為5-10％的乙腈水溶液可有效提取所有14種霉菌毒素，提取率超過(guò)純水和體積分?jǐn)?shù)20％的乙腈水溶液。

進(jìn)一步地，S1包括以下步驟：

S11：取生鮮乳樣品，4500rpm離心后進(jìn)行中速濾紙過(guò)濾；

S12：將S11中過(guò)濾得到的濾液與所述乙腈水溶液混勻；

S13：使S12得到的混合溶液通過(guò)三合一多毒素抗體親和柱(黃曲霉毒素,赭曲霉毒素，玉米赤霉烯酮類(lèi)毒素抗體)，并用甲醇洗脫，吹干，得到霉菌毒素殘?jiān)?/p>

S14：用體積分?jǐn)?shù)10％的甲醇水溶液溶解所述霉菌毒素殘?jiān)?，?.22μm的濾膜過(guò)濾，得到所述霉菌毒素提取物。

優(yōu)選地，S2中液相色譜使用Kinetex C18色譜柱。

優(yōu)選地，所述三重四極桿質(zhì)譜儀采取MRM模式定量。

優(yōu)選地，還設(shè)置有不含霉菌毒素的生鮮乳作為陰性對(duì)照。

附圖說(shuō)明

圖1為14種霉菌毒素的總離子流色譜圖；