[發(fā)明專利]一種羅氏沼蝦螺原體可視化快速檢測試劑盒及方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710491995.X
• 申請日: 2017-06-26
• 公開（公告）號: CN107254527B
• 公開（公告）日: 2021-03-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 潘曉藝;藺凌云;徐洋;袁雪梅;沈錦玉;姚嘉赟;尹文林
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江省淡水水產(chǎn)研究所
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 成都天匯致遠(yuǎn)知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 51264
• 代理人: 韓曉銀

本發(fā)明公開了一種羅氏沼蝦螺原體可視化快速檢測試劑盒及方法，其中，羅氏沼蝦螺原體可視化快速檢測試劑盒包括螺原體DNA提取試劑和反應(yīng)試劑，所述的反應(yīng)試劑中含有用于檢測羅氏沼蝦螺原體擴增用核酸引物組，該引物組包含引物MrSpi?P1、引物MrSpi?B1、引物MrSpi?P2、引物MrSpi?B2、引物MrSpi?P3和引物MrSpi?B1；本發(fā)明的快速診斷試劑盒建立了一套經(jīng)過優(yōu)化的快速擴增反應(yīng)體系，不但使得羅氏沼蝦螺原體定性檢測更加簡便快速、特異性高、靈敏度高，而且該試劑盒可用于現(xiàn)場檢測，具有很高的科研和經(jīng)濟價值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于靶基因片斷的快速檢測領(lǐng)域，具體地說，涉及一種羅氏沼蝦螺原體可視化快速檢測試劑盒及方法。

背景技術(shù)

羅氏沼蝦螺原體(Macrobrachium rosenbergii Spiroplasma，MrSpi)是一種可引起羅氏沼蝦幼體和成蝦致死性疾病的病原微生物。其通過鰓、腸道和表皮進入羅氏沼蝦體內(nèi)，在血細(xì)胞中寄生和增殖，進而感染結(jié)締組織，引起羅氏沼蝦幼體活力和抗病力降低，引起羅氏沼蝦成蝦肌肉損傷和鰓水腫，進而引起羅氏沼蝦幼體和成蝦死亡。羅氏沼蝦螺原體是我國新近發(fā)現(xiàn)并在羅氏沼蝦苗種中流行的新病原，該病原廣泛存在于水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境中，已在多種蝦類中被發(fā)現(xiàn)。根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查，羅氏沼蝦螺原體在羅氏沼蝦育苗和養(yǎng)殖期間具有很高的感染風(fēng)險。

專利一種檢測水生動物螺原體的酶聯(lián)免疫試劑盒(申請?zhí)枺?00710025337.8，申請日：2007-07-24，公開號：CN 101105494A，公開日：2008-01-16)是一種利用免疫學(xué)原理進行設(shè)計的檢測試劑盒，存在檢測步驟封鎖且靈敏度低的缺陷；專利蝦蟹螺原體病原的原位雜交檢測探針及試劑盒(申請?zhí)枺?01210443870.7，申請日：2012.11.08，公開號：CN103805680A，公開日：2014.05.21)是一種利用核酸雜交原理進行設(shè)計的檢測試劑盒，存在對操作人員要求高、步驟繁瑣、檢測失敗率高等缺點。

因此，研制一種操作簡便、臨床實用、檢測靈敏度和特異性高的羅氏沼蝦螺原體檢測試劑盒，具有重要應(yīng)用經(jīng)濟價值和市場前景。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明針對上述的問題，提供了一種羅氏沼蝦螺原體可視化快速檢測試劑盒及方法，本發(fā)明的試劑盒特異性強，敏感性高；本發(fā)明羅氏沼蝦螺原體快速檢測方法利用所述試劑盒檢測，該方法方便、靈敏、準(zhǔn)確、快速。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明公開了一種用于檢測羅氏沼蝦螺原體擴增用核酸引物組，該引物組包含引物MrSpi-P1、引物MrSpi-B1、引物MrSpi-P2、引物MrSpi-B2、引物MrSpi-P3和引物MrSpi-B3；

所述的引物MrSpi-P1的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；

所述的引物MrSpi-B1的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；

所述的引物MrSpi-P2的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；

所述的引物MrSpi-B2的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示；

所述的引物MrSpi-P3的核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示；

所述的引物MrSpi-B3的核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示。

本發(fā)明還公開了一種羅氏沼蝦螺原體可視化快速檢測試劑盒，包括螺原體DNA提取試劑和反應(yīng)試劑，所述的反應(yīng)試劑中含有上述的用于檢測羅氏沼蝦螺原體擴增用核酸引物組。

進一步地，所述螺原體DNA提取試劑的成分為60mM Tris、800mM NaCl、20mM EDTA、1％體積百分比NP-40的pH 8.0的裂解液。

進一步地，所述反應(yīng)試劑包括以下組分：