[發明專利]一種PSI-OAm-NAPI兩親聚合納米材料的定量檢測方法

有效

• 申請號: 201710489336.2
• 申請日: 2017-06-24
• 公開（公告）號: CN107328929B
• 公開（公告）日: 2019-06-04
• 發明（設計）人: 張明翠;閆希
• 申請（專利權）人: 安徽師范大學
• 主分類號: G01N33/535
• 分類號: G01N33/535;G01N33/541;G01N21/31
• 代理公司: 蕪湖安匯知識產權代理有限公司 34107
• 代理人: 尹婷婷

1.一種PSI-OAm-NAPI兩親聚合納米材料的定量檢測方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

a、水解PSI-OAm-NAPI，得到水解后的PSI-OAM-NAPI兩親聚合納米材料溶液；

b、制備PSI-OAM-NAPI兩親聚合納米材料的免疫抗原和包被抗原；

c、制備PSI-OAM-NAPI兩親聚合納米材料抗體；所述抗體的效價為1:64000；

d、將PSI-OAM-NAPI兩親聚合納米材料包被抗原經包被液稀釋后包被于酶標板中，封閉、加入不同濃度的PSI-OAM-NAPI兩親聚合納米材料標準液，以PSI-OAM-NAPI兩親聚合納米材料抗體作為一抗，辣根過氧化物酶標記的羊抗兔抗體作為二抗，進行間接競爭酶聯免疫分析法；

e、以PSI-OAM-NAPI兩親聚合納米材料標準液濃度的對數為橫坐標，吸光度值為縱坐標建立標準曲線，從而定量檢測出PSI-OAM-NAPI兩親聚合納米材料的濃度；

所述步驟a具體包括以下步驟：將40~80mg PSI-OAm-NAPI納米粒子與0.4~0.8mg聚乙二醇-聚乳酸羥基乙酸共聚物溶解于1~6mL三氯甲烷溶液中，加入8~16mL濃度為0.002~0.008mg/mL新配置的氫氧化鈉溶液超聲，50~60℃蒸發除去三氯甲烷；最后經過離心取沉淀分散于PBS溶液中得到水解后的PSI-OAM-NAPI兩親聚合納米材料溶液。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述標準曲線的線性方程為：A=0.951-0.104lgC，相關系數R= -0.999，線性范圍為0.82~6.31×10⁴ng/mL，檢出限為0.057 ng/mL；其中， A為490nm處吸光度值，C為PSI-OAM-NAPI兩親聚合納米材料的濃度。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述水解后的PSI-OAM-NAPI兩親聚合納米材料溶液的濃度為2~10mg/mL。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟b具體包括以下步驟：

b-1、將N-羥基琥珀酰亞胺、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽和牛血清白蛋白加入到水解后的PSI-OAM-NAPI兩親聚合納米材料溶液中，18~29℃溫育2~6小時后離心分離，將沉淀分散到中性PBS緩沖液中得到免疫抗原溶液，將溶液裝入透析袋中，放入PBS緩沖溶液中透析過夜，即可制得PSI-OAM-NAPI兩親聚合納米材料的免疫抗原；

b-2、將步驟b-1中的牛血清白蛋白替換為雞卵清白蛋白，其他條件保持不變，即可制得PSI-OAM-NAPI兩親聚合納米材料的包被抗原。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述步驟b具體包括以下步驟：

b-1、向2mL步驟a得到的水解后的PSI-OAM-NAPI兩親聚合納米材料溶液中加入包含有0.2~2 mg的N-羥基琥珀酰亞胺和0.2~2mg的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽的2mLPBS緩沖溶液，震蕩反應20~30min后加入2~10mg牛血清白蛋白，于25℃下反應2~4h，之后于離心機12000~20000r/min離心10~15min，取沉淀分散到PBS緩沖液中，得到免疫抗原溶液，將溶液裝入透析袋中，放入PBS緩沖溶液中透析過夜，即可制得PSI-OAM-NAPI兩親聚合納米材料的免疫抗原，其濃度為1~5mg/mL；

b-2、將步驟b-1中的牛血清白蛋白替換為雞卵清白蛋白，其他條件保持不變，即可制得PSI-OAM-NAPI兩親聚合納米材料的包被抗原，其濃度為1~5mg/mL。