[發(fā)明專利]一種靶向DNA納米自組裝體載NF-κB decoy ODNs的制備方法及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710488785.5
• 申請日: 2017-06-23
• 公開（公告）號: CN107335065B
• 公開（公告）日: 2020-02-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙永星;張楠;華海嬰;付玲玲
• 申請（專利權(quán)）人: 鄭州大學(xué)
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K47/54;A61K47/64;A61P29/00;A61P19/02
• 代理公司: 41125 鄭州優(yōu)盾知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 孫詩雨

本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種靶向DNA納米自組裝體載NF?κB decoy ODNs的制備方法及其應(yīng)用。靶向DNA納米自組裝體載NF?κB decoy ODNs由DNA四面體、NF?κB decoy ODNs、VCAM?1靶向多肽組成，其中NF?κB decoy ODNs和VCAM?1靶向多肽通過堿基互補配對原則連接到DNA納米自組裝體上。本發(fā)明的DNA納米自組裝體的平均粒徑小于10nm。靶向多肽修飾的DNA納米自組裝體載NF?κB decoy ODNs提高了基因藥物的靶向性，提高了藥物的體外抗炎效果，對細(xì)胞及組織基本無毒性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種靶向DNA納米自組裝體載NF-κB decoy ODNs的制備方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

核因子-κB/ Rel轉(zhuǎn)錄因子家族在協(xié)調(diào)參與免疫和炎癥過程的幾種基因的表達(dá)中起著中心作用，NF-κB 幾乎在所有細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中都有表達(dá)，正常情況下，NF-κB通常是抑制性蛋白（IκB）與p50和p65亞基結(jié)合的異源二聚體，但在炎癥介入的疾病的相關(guān)細(xì)胞中，細(xì)胞被多種因子激活，如促炎細(xì)胞因子，細(xì)菌脂多糖（LPS）和佛波酯等，NF-κB 被激活，NF-κB的抑制劑IκB 會被磷酸化而被降解，并釋放脫離了IκB 的P50/P65 復(fù)合體，P50/P65 復(fù)合體進(jìn)入細(xì)胞，啟動各種炎癥基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。基因藥物NF-κB decoy ODNs可以特異性地結(jié)合NF-κB 的P50/P65 復(fù)合體，與P50/P65 復(fù)合體特異性結(jié)合后可阻止NF-κB 進(jìn)入細(xì)胞核，抑制炎癥基因的轉(zhuǎn)錄，抑制炎癥因子的產(chǎn)生，從而降低炎癥反應(yīng)。

NF-κB decoy ODNs與傳統(tǒng)治療方法相比，能特異性結(jié)合核因子-κB ，從根源上改善炎癥的發(fā)生，從而達(dá)到治療目的，與傳統(tǒng)藥物相比，具有高效低毒的優(yōu)勢。然而游離的NF-κB decoy ODNs由于細(xì)胞膜傳遞性差，在體內(nèi)易受酶的降解，靶向性差而極大地限制了其發(fā)揮作用。DNA納米自組裝體本身具有良好的穩(wěn)定性，良好的生物相容性，大小和形狀的高度可

控性等優(yōu)點，DNA納米自組裝體載NF-κB decoy ODNs將顯著提高NF-κB decoyODNs 在體內(nèi)外的穩(wěn)定性和療效，而且NF-κB decoy ODNs 納米組裝體通過高效阻止炎癥反應(yīng)，可有效控制疾病發(fā)展。

血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子（Vascular cell adhesionmolecule-1, VCAM-1），是一個90K~110K 道爾頓的糖蛋白，其在炎癥滑膜血管內(nèi)皮細(xì)胞、炎癥巨噬細(xì)胞和炎癥成纖維樣滑膜細(xì)胞表面均呈現(xiàn)高表達(dá),主要與存在于白細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞表面的受體α4整合素家族的α4β1(又稱very lateantigen 4,VLA-4)結(jié)合,介導(dǎo)并增強白細(xì)胞向血管內(nèi)皮細(xì)胞和炎癥成纖維樣滑膜細(xì)胞的黏附，從而增強白細(xì)胞向滑膜關(guān)節(jié)腔的滲入和停留；參與淋巴細(xì)胞的活化、遷移和造血細(xì)胞的生長發(fā)育,并在腫瘤、炎癥轉(zhuǎn)移等病理過程中起重要作用。在DNA納米自組裝體體上修飾VCAM-1 靶向多肽，將使納米組裝體像白細(xì)胞一樣易于向發(fā)炎滑膜聚集。由于滑模腔內(nèi)的炎癥細(xì)胞表面高表達(dá)VCAM-1，因此被VCAM-1靶向多肽修飾的NF-κBdecoy ODNs 納米組裝體可主動靶向于滑模腔內(nèi)的炎癥細(xì)胞，提高整體的抗炎效果，達(dá)到高效低毒治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的目的。

目前，通過DNA納米自組裝體載NF-κB decoy ODNs并修飾VCAM-1靶向多肽形成的藥物傳遞系統(tǒng)在治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的應(yīng)用中尚未報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明為解決NF-κB decoy ODNs在治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中穩(wěn)定性差、抗炎效果不佳、副作用大的技術(shù)難題，公開了一種靶向DNA納米自組裝體載NF-κB decoy ODNs的制備方法及其應(yīng)用。

為解決上述技術(shù)難題，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種靶向DNA納米自組裝體載NF-κB decoy ODNs的制備方法，步驟如下：