[發明專利]一種靶向DNA納米自組裝體載NF-κB decoy ODNs的制備方法及其應用

有效

• 申請號: 201710488785.5
• 申請日: 2017-06-23
• 公開（公告）號: CN107335065B
• 公開（公告）日: 2020-02-14
• 發明（設計）人: 趙永星;張楠;華海嬰;付玲玲
• 申請（專利權）人: 鄭州大學
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K47/54;A61K47/64;A61P29/00;A61P19/02
• 代理公司: 41125 鄭州優盾知識產權代理有限公司
• 代理人: 孫詩雨

1.一種靶向DNA納米自組裝體載NF-κB decoy ODNs的制備方法，其特征在于，步驟如下：

（1）將四條單鏈直鏈DNA與組成NF-κB decoy ODNs的兩條鏈NF- κB C、NF-κB D在體外緩沖鹽溶液中，退火自組裝形成TD-dODNs溶液；

（2）ssDNA-Peptide：低速攪拌向ssDNA中滴加交聯劑，在pH7~9條件下，室溫反應2h，透析24h除去未反應的多肽，得到ssDNA-SMCC，然后加入VCAM-1靶向多肽，pH6.5~7.5條件下，反應8~12h，透析24h除去未反應的多肽，得到ssDNA-Peptide；

（3）向步驟（1）中制備的TD-dODNs溶液中加入ssDNA-peptide，以2 min/℃的速度從40℃降至20℃，完成靶向DNA納米自組裝體載NF-κB decoy ODNs的制備；

所述步驟（1）中四條單鏈直鏈DNA為單鏈直鏈S1、S2-F、S3、S4或單鏈直鏈S1、S2-F、S3-P、S4或單鏈直鏈S1-P、S2-F、S3-P、S4-F或單鏈直鏈S1、S2、S3、S4；四條單鏈直鏈DNA與NF- κB C和NF-κB D反應的物質的量比為：1:1:1:1：（1~3）：（1~3）；

所述單鏈直鏈S1的序列如SEQ ID NO：1所示，單鏈直鏈S1-P的序列如SEQ ID NO：3所示，單鏈直鏈S2的序列如SEQ ID NO：4所示，單鏈直鏈S2-F的序列如SEQ ID NO：5所示，單鏈直鏈S3的序列如SEQ ID NO：6所示，單鏈直鏈S3-P的序列如SEQ ID NO：7所示，單鏈直鏈S4的序列如SEQ ID NO：8所示，單鏈直鏈S4-F的序列如SEQ ID NO：9所示，NF-ΚB C序列如SEQID NO：10所示，NF-ΚB D序列如SEQ ID NO：11所示。

2.如權利要求1所述的靶向DNA納米自組裝體載NF-κB decoy ODNs的制備方法，其特征在于：所述步驟（1）中體外緩沖鹽溶液為將MgCl₂溶于濃度5~20mM的Tris·HCl溶液中，MgCl₂的終濃度為5~20mM。

3.如權利要求1所述的靶向DNA納米自組裝體載NF-κB decoy ODNs的制備方法，其特征在于：所述步驟（1）中退火條件為95℃保持5min，10s內由95℃降溫至4℃，4℃保持30s。

4.如權利要求1所述的靶向DNA納米自組裝體載NF-κB decoy ODNs的制備方法，其特征在于：所述步驟（2）中，ssDNA序列如SEQ ID NO：12所示，其3’端C7經氨基修飾；交聯劑為Sulfo-SMCC溶液；VCAM-1靶向多肽序列如SEQ ID NO：11所示；ssDNA：VCAM-1靶向多肽的物質的量比為20:1。

5.如權利要求1所述的靶向DNA納米自組裝體載NF-κB decoy ODNs的制備方法，其特征在于：所述步驟（3）中，ssDNA-peptide：TD-dODNs的物質的量比為1：（1~2）。

6.如權利要求1所述的靶向DNA納米自組裝體載NF-κB decoy ODNs的制備方法，其特征在于：所述DNA納米自組裝體載NF-κB decoy ODNs的平均粒徑小于10nm。

7.權利要求1-6任一項所述的靶向DNA納米自組裝體載NF-κB decoy ODNs作為制備抗類風濕性關節炎免疫治療藥物的應用。