[發(fā)明專利]一種快速篩選穩(wěn)定高效苯酚降解嗜鹽菌的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710488741.2 | 申請日： | 2017-06-23 |
| 公開（公告）號： | CN107325981B | 公開（公告）日： | 2020-07-17 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 許繼飛;趙吉;宋曉雪;武琳慧;劉崎峰;李靜泉;包智華 | 申請（專利權(quán)）人： | 內(nèi)蒙古大學(xué) |
| 主分類號： | C12N1/20 | 分類號： | C12N1/20;C12N1/02;C02F3/34;A62D3/02;C02F101/34;A62D101/28 |
| 代理公司： | 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君;陳征 |
| 地址： | 010021 內(nèi)蒙古自*** | 國省代碼： | 內(nèi)蒙古;15 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 快速 篩選 穩(wěn)定 高效 苯酚 降解 嗜鹽菌 方法 | ||
本發(fā)明提供一種快速篩選穩(wěn)定高效苯酚降解嗜鹽菌的方法，將采集的固體或液體樣品在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，富集菌體后取菌液于固體培養(yǎng)平板涂抹均勻后培養(yǎng)，獲得平板單菌落；將單菌落再次在固體平板培養(yǎng)基上連續(xù)劃線，培養(yǎng)，得到純培養(yǎng)的嗜鹽菌株，接入含有苯酚的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)；之后再取菌液接種于新的含有苯酚的液體培養(yǎng)基，如此反復(fù)5?8次，可獲得高效穩(wěn)定的降解苯酚嗜鹽菌菌株。本發(fā)明采用固液兩步法，先分離篩選嗜鹽菌，再篩選苯酚降解嗜鹽菌，大大減少了篩選苯酚嗜鹽降解菌的時(shí)間，克服了傳統(tǒng)分離方法獲得的苯酚降解嗜鹽菌時(shí)間長且降解苯酚不穩(wěn)定的缺陷。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及微生物分離技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，涉及一種快速篩選穩(wěn)定高效苯酚降解嗜鹽菌的方法。
背景技術(shù)
苯酚及其衍生物對人和動(dòng)植物的毒性很強(qiáng)，已被列入環(huán)境優(yōu)先控制污染物名單。含酚廢水主要來源于造紙、煉油、合成纖維、合成橡膠、農(nóng)藥等行業(yè)，是工業(yè)排放廢水中主要的污染物。在這些含酚廢水中除了含苯酚類污染物之外，往往還含有大量鹽分而使之成為高鹽含酚廢水，這類廢水排放到環(huán)境中會(huì)對土壤、地表水和地下水造成嚴(yán)重污染。由于高鹽環(huán)境對微生物生長具有抑制和毒害作用，使得常規(guī)的生物降解技術(shù)在處理這類廢水時(shí)存在瓶頸問題。嗜鹽菌能直接用于去除高鹽工業(yè)廢水中的有機(jī)污染物而無需先降低廢水鹽度，因而逐漸受到人們的廣泛關(guān)注。
目前，分離苯酚降解嗜鹽菌菌株都是采用鹽度和苯酚雙選擇壓力下篩選或者是先篩選嗜鹽菌，而后在有苯酚壓力的條件下馴化。第一種方法，由于具有雙重選擇壓力，因此菌的生長十分緩慢，較難在培養(yǎng)基上獲得生長良好的單菌落，分離菌株的時(shí)間較長，且效果不佳；第二種方法，對獲得嗜鹽菌僅僅通過1-2次的苯酚降解馴化，即認(rèn)為獲得了苯酚降解嗜鹽菌，但是通過1-2次的馴化過程，可能不僅不能獲得高效的苯酚嗜鹽降解菌，即使在1-2次有很好的苯酚降解效果，但是降解效果不具有穩(wěn)定性，還可能遺漏具有高效降解苯酚的嗜鹽菌。本方法針對目前技術(shù)的缺陷，提出分步篩選與多次馴化相結(jié)合的苯酚嗜鹽菌的篩選方法，不僅能夠快速的獲得苯酚嗜鹽降解菌，而且降解苯酚的能力高效且穩(wěn)定。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種快速篩選穩(wěn)定高效苯酚降解嗜鹽菌的方法。
本發(fā)明的方法包括以下步驟：
(1)將采集的嗜鹽菌在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，富集菌體后取菌液于固體平板培養(yǎng)基涂抹均勻后培養(yǎng)，獲得平板單菌落；
(2)將單菌落再次在固體平板培養(yǎng)基上連續(xù)劃線，培養(yǎng)，得到純培養(yǎng)的嗜鹽菌株；
(3)將純培養(yǎng)的嗜鹽菌株接入含有苯酚的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)；之后再取菌液接種于新的含有苯酚的液體培養(yǎng)基，如此反復(fù)5-8次。
其中，步驟(1)的液體培養(yǎng)基其1L的配方為：10g MgSO4·7H2O、0.2g CaCl2·2H2O、2-5g KCl、1-2.5g胰蛋白胨、5-10g酵母提取物、NaCl 5％-20％、H2O補(bǔ)至1L,pH為7.2±0.3；步驟(1)的固體平板培養(yǎng)基其配方為：按質(zhì)量體積比向上述液體培養(yǎng)基加入2％的瓊脂。
步驟(1)液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)條件為：20-40℃，100-300rpm；固體平板培養(yǎng)基培養(yǎng)條件為20-40℃。
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