[發(fā)明專利]用于檢測右側(cè)缺失α3.7地中海貧血的引物組及試劑盒

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201710488631.6
• 申請日: 2017-06-23
• 公開（公告）號: CN109112207A
• 公開（公告）日: 2019-01-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳治中;卿吉琳
• 申請（專利權(quán)）人: 陳治中
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11129
• 代理人: 向群

本發(fā)明提供了一種用于檢測右側(cè)缺失α^3.7地中海貧血的引物組及試劑盒，屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域。所述引物組包括如下引物對：上下游引物序列分別如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.3所示的APF/APR；上下游引物序列分別如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的3.7F/3.7R。本發(fā)明還提供了基于所述引物組的試劑盒。本發(fā)明的引物組和試劑盒具有快捷簡潔、高度的穩(wěn)定性、靈敏性和準(zhǔn)確性，特異性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種用于檢測右側(cè)缺失α^3.7地中海貧血的引物組及試劑盒。

背景技術(shù)

α-地中海貧血(簡稱α-地貧)是由于α-珠蛋白的基因缺失或功能障礙，導(dǎo)致a珠蛋白膚鏈合成減少或不合成引起,是人類最常見的一種不完全顯性的單基因遺傳性血紅蛋白疾病。1925年，Thomas Cooley和Pear Lee在意大利兒童中首次描述這種溶血性貧血病，廣泛發(fā)生于熱帶和亞熱帶國家，全球約18億攜帶者，在我國長江以南是本病的高發(fā)地區(qū)如廣東、廣西、四川、重慶等地發(fā)病率高，大多以無明顯癥狀的攜帶者形式廣泛存在。研究表明在廣東、廣西α-地貧基因的人群攜帶率分別高達(dá)8.53-15.5％。由于α-地貧具有普遍性、人口基數(shù)大、涉及范圍廣等特點，包括我國南方在內(nèi)的重癥地中海貧血患兒的出生是世界公認(rèn)的公共健康衛(wèi)生問題。

α-珠蛋白基因位于人類基因組第16號染色體短臂末端α-珠蛋白基因簇中(16p13.3)。該基因簇包括二個α基因(α1和α2)、一個胚胎期α類基因(ζ2),三個假基因(ψζ1,ψα2,ψα1)和一個功能未明的基因(θ1)，其序列順序為:5'-ζ2-ψζ1-ψα2-ψα1-α2-α1-θl-3'，全長約50kb。

α-地中海貧血是由于α-珠蛋白基因突變或缺失引起的。根據(jù)分子缺陷可將其分為:幾個核苷酸的插入與缺失或單個堿基替換的非缺失型α-地貧和大片段基因的缺失型α-地貧兩大類到目前為止，全世界至少己報道了41種缺失型α-地中海貧血和至少32種α-地中海貧血點突變。在中國人己報道了至少8種缺失型α-地中海貧血，其中東南亞型缺失(--^SEA)、右側(cè)缺失(-α^3.7)和左側(cè)缺失(-α^4.2)是在我國最常見的α-地貧缺失類型。根據(jù)臨床表現(xiàn)又將其分為靜止型、標(biāo)準(zhǔn)型、血紅蛋白H病與Hb Bart's水腫胎兒綜合征四類。其中臨床癥狀最重的為Hb Bart's水腫胎兒綜合征，患兒通常不能存活；其次為血紅蛋白H病(HbH)，其臨床表現(xiàn)往往輕重不一，通常非缺失型HbH病人的臨床表現(xiàn)往往比缺失型HbH病人更為嚴(yán)重。

目前該病尚無理想的治療方法，研究表明在地貧高發(fā)區(qū)，對夫婦雙方均為地貧基因攜帶者的孕婦在妊娠早期篩查或中期應(yīng)用相應(yīng)分析技術(shù)通過遺傳篩查和產(chǎn)前基因診斷選擇性地淘汰中重癥α-地貧胎兒則是控制該病發(fā)生的首要途徑和有效預(yù)防措施。因此，對于α-地貧的檢測急需一種簡單、能快速準(zhǔn)確基因分型的技術(shù)手段。

目前對α-地貧篩查方法如血常規(guī)參數(shù)檢測分析、紅細(xì)胞滲透脆性試驗、血紅蛋白電泳試驗等特異性不高，較易產(chǎn)生假陰性。對于α-地中海貧血的分子診斷,Southern Blot雜交技術(shù)是金標(biāo)準(zhǔn),準(zhǔn)確性高,但操作繁瑣、標(biāo)本用量大、費時費力、檢測通量小而不適合常規(guī)檢測；其他TaqMan探針技術(shù)、變性高效液相色譜(DHPLC)、DNA直接測序和DNA微陣列技術(shù)等。但這些方法檢測過程繁瑣、檢測所用時間長、使用試劑或者儀器昂貴和特殊的標(biāo)記引物等，因而不利于臨床廣泛的推廣應(yīng)用。

現(xiàn)有基于缺口PCR(Gap-PCR)、寡核普酸探針雜交、高分辨的溶解曲線分析、TaqMan探針技術(shù)、變性高效液相色譜技術(shù)，多重連接酶依賴的探針擴增技術(shù)(MLPA)、基因芯片等技術(shù)，均需要提取外周血、絨毛和/或羊水中DNA，才能進行以后的實驗操作，而DNA的質(zhì)量是PCR成功的一個非常關(guān)鍵的因素，并且提取與純化DNA過程極易污染，使得實驗易出現(xiàn)假陰性或者假陽性。