[發(fā)明專(zhuān)利]用于檢測(cè)右側(cè)缺失α3.7地中海貧血的引物組及試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710488631.6
• 申請(qǐng)日: 2017-06-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109112207A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-01-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳治中;卿吉琳
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 陳治中
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6883
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 北京海虹嘉誠(chéng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11129
• 代理人: 向群

1.用于檢測(cè)右側(cè)缺失α^3.7地中海貧血的引物組，包括如下引物對(duì)：

上下游引物序列分別如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.3所示的APF/APR；

上下游引物序列分別如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的3.7F/3.7R。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的引物組，其特征在于，所述檢測(cè)指以人體血液、和/或體液、和/或人體基因組DNA、和/或胚胎的遺傳物質(zhì)為模板，用所述引物組進(jìn)行PCR擴(kuò)增后，將所得擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳即可獲知結(jié)果。

3.用于快速檢測(cè)右側(cè)缺失α^3.7地中海貧血基因型的試劑盒，包括權(quán)利要求1所述的引物組。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述快速檢測(cè)指，直接以人體血液、和/或體液、和/或胚胎的遺傳物質(zhì)為PCR反應(yīng)的模板，用所述引物組進(jìn)行PCR擴(kuò)增后，將所得擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳即可獲知結(jié)果。

5.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的試劑盒，其特征在于，還包括用于進(jìn)行PCR和/或電泳的試劑。

6.根據(jù)權(quán)利要求2-4任一所述的試劑盒，其特征在于，所述用于進(jìn)行PCR的試劑包括dNTP、DNA聚合酶、緩沖液、雙蒸水、MgCl₂；

所述用于進(jìn)行電泳的試劑包括瓊脂糖、蒸餾水、核酸染料；

所述核酸染料選自：EB、GelGreen、SYBR Green Ⅰ、GoldView、GelRed和GelGreen。

7.根據(jù)權(quán)利要求2-5任一所述的試劑盒，其特征在于，所述PCR的反應(yīng)體系為：模板1～4μl；各引物：0.05～1μmol/L；MgCl₂濃度為1.5～5mM/L；dNTP的濃度為100～500μM/L；DNA聚合酶的濃度為1～4U/反應(yīng)；

所述PCR的反應(yīng)體系優(yōu)選包括下述體積份數(shù)的各組分：MightyAmp Taq 0.1-1份、2×MightyAmp Buffer 10份、APF/3.7F 0.1-1份、APR 0.1-1份、3.7R 0.1-1份、模板+超純水6-9.6份；

所述PCR的反應(yīng)體系進(jìn)一步優(yōu)選包括下述體積份數(shù)的各組分：MightyAmp Taq 0.5份、2×MightyAmp Buffer 10份、APF/3.7F 0.5份、APR 0.3份、3.7R 0.2份、模板+超純水8.5份；

優(yōu)選的，所述引物組各引物摩爾濃度比例如下：

APF/3.7F∶APR∶3.7R＝5∶3∶2；

所述PCR的反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃3～5分鐘；以94℃30秒，62～66℃60秒，72℃140秒為1個(gè)循環(huán)，進(jìn)行34個(gè)循環(huán)；72℃8分鐘；12℃12秒；

所述PCR的反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃5分鐘；以94℃30秒，64℃60秒，72℃140秒為1個(gè)循環(huán)，進(jìn)行34個(gè)循環(huán)；72℃8分鐘；12℃12秒；所述電泳指，將所述PCR反應(yīng)產(chǎn)物置于質(zhì)量比為0.8～1.5％瓊脂糖凝膠中，在5V/cm電壓下電泳約40～55分鐘；所述瓊脂糖凝膠中還添加有體積比0.005％核酸染料。

8.根據(jù)權(quán)利要求4或7所述的試劑盒，其特征在于，

所述模板還包括固定在固體載體上的人體血液、和/或體液、和/或基因組DNA、和/或胚胎的遺傳物質(zhì)；

優(yōu)選地，所述模板可以選自濾紙片干血斑樣品、濾紙片干羊水樣品、濾紙片干漿膜腔液樣品、濾紙片干關(guān)節(jié)液樣品、濾紙片干唾液樣品、濾紙片干基因組DNA樣品、和/或?yàn)V紙片干胚胎的遺傳物質(zhì)樣品。

而濾紙片是血液標(biāo)本采集和運(yùn)輸?shù)臉O好載體，全血滴在濾紙片上制成濾紙片干血斑(Dried blood spots,DBS),有很好的生物穩(wěn)定性和安全性,便于儲(chǔ)存和運(yùn)輸，隨著我國(guó)產(chǎn)前篩查、新生兒篩查力度的不斷增強(qiáng)，特別是當(dāng)篩查范圍擴(kuò)大到一些地域偏遠(yuǎn)、醫(yī)療條件相對(duì)落后的地區(qū)時(shí)，應(yīng)用濾紙干血斑(DBS)對(duì)于患者標(biāo)本采集、保存和運(yùn)輸及流行病學(xué)調(diào)查則更為有利。而這在地貧方面應(yīng)用甚少。